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小鼠透明質(zhì)酸ELISA 檢測試劑盒實驗方案

點擊次數(shù):1059 更新時間:2012-09-04
 

小鼠透明質(zhì)酸ELISA 檢測試劑盒實驗方案

試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
80 nmol/L (6號標(biāo)準(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
40 nmol/L (5號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20 nmol/L (4號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 nmol/L (3號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.0 nmol/L (2號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5 nmol/L (1號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 nmol/L (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍

小鼠透明質(zhì)酸ELISA 檢測試劑盒

稀釋。


操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案
標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/L)
A 80 80 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 40 40 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 20 20 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 10 10 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品小鼠透明質(zhì)酸ELISA 檢測試劑盒 樣品 樣品 樣品 樣品
E 5.0 5.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 2.5 2.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

 

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