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用elisa試劑盒檢測(cè)樣本的原理和步驟

點(diǎn)擊次數(shù):2014 更新時(shí)間:2010-11-24
 

用elisa試劑盒檢測(cè)樣本的原理和步驟

 

表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)

(一)真核表達(dá)產(chǎn)物

1、   細(xì)胞上清(分泌性蛋白)

1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;

1.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;

2、   細(xì)胞裂解物(非分泌性蛋白)

2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,然后用001M PBS(pH 7.4)將細(xì)胞吹下至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;

2.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至另一10ml離心管中,0.01M PBS(pH 7.4)重懸,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmp x10min,取上清, -20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理。

 
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