一、問:用HPLC進行分析時保留時間有時發(fā)生漂移,有時發(fā)生快速變化,原因何在?如何解決?
答:關于漂移問題:
1.溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定
2.流動相發(fā)生變化,解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應等
3.柱子未平衡好,需對柱子進行更長時間的平衡
關于快速變化問題
1.流速發(fā)生變化,解決辦法是重新設定流速,使之保持穩(wěn)定
2.泵中有氣泡,可通過排氣等操作將氣泡趕出。
3.流動相不合適,解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合
二、問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
答:1.篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
2.存在干擾峰,解決辦法為使用較長的柱子,改換流動相或更換選擇性好的柱子
三、問:HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
答:1.樣品量不足,解決辦法為增加樣品量 醫(yī).學教育網搜集整理
2.樣品未從柱子中流出??筛鶕?jù)樣品的化學性質改變流動相或柱子
3.樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學性質調整波長或改換檢測器
4.檢測器衰減太多。調整衰減即可。
5.檢測器時間常數(shù)太大。解決辦法為降低時間參數(shù)
6.檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。
7.檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。
8.記錄儀測壓范圍不當。調整電壓范圍即可。
9.流動相流量不合適。調整流速即可。
10.檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。
四、問:做HPLC分析時,柱壓不穩(wěn)定,原因何在?如何解決?
答:原因可能有:
1.泵內有空氣,解決的辦法是清除泵內空氣,對溶劑進行脫氣處理;
2.比例閥失效,更換比例閥即可;
3.泵密封墊損壞,更換密封墊即可;
4.溶劑中的氣泡,解決的辦法是對溶劑脫氣,必要時改變脫氣方法;
5.系統(tǒng)檢漏,找出漏點,密封即可;
6.梯度洗脫,這時壓力波動是正常的。