適用
Abraxis氟喹諾酮檢測試劑盒適用于檢測食物產品中氟喹諾酮的含量。
原理
Abraxis 氟喹諾酮檢測試劑盒的原理是競爭酶聯免疫反應。利用提取液通過震蕩萃取從樣品中提取氟喹諾
酮。然后經稀釋、過濾、待測。在固相載體微孔板中加入氟喹諾酮-HRP 酶結合物，然后加入標準和處理的
樣品，然后再加入氟喹諾酮抗體引發(fā)反應。孵育10 分，樣品中的氟喹諾酮和酶標氟喹諾酮競爭于氟喹諾
酮抗體反應，氟喹諾酮抗體和微孔結合。洗板除去沒有反應的試劑。加入底物顯色劑、無色的顯色劑轉化
為藍色的產物；孵育30 分鐘后加入反應終止液終止反應，顏色由藍色變?yōu)辄S色；在450nm波長進行檢測，
樣品中的氟喹諾酮濃度與吸收光強度成反比。
特異性
Abraxis氟喹諾酮檢測試劑盒不能區(qū)分不同種類的氟喹諾酮，檢測不同的氟喹諾酮交叉率也不同。以下是試
劑盒對不同的氟喹諾酮的交叉反應列表。
檢測限
肉、魚蝦: 1 ppb
蜂蜜: 2 ppb
試劑盒組成
試劑盒保存在2-8攝氏度。在有效期內都可以使用
1、96孔酶標板：1塊（12×8條）。
2、氟喹諾酮標準品貯備液（Standard）: 6瓶（1ml/瓶），濃度分別為0, 0.2, 0.8, 3.2 6.4 和16 μg/L （ppb）
3、氟喹諾酮HRP酶標記物：1瓶（6ml）
4、兔抗氟喹諾酮抗體：1瓶（6ml）
5、5X 濃縮洗液：1瓶（100ml）
6、底物顯色液：1瓶（12ml）
7、終止液：1瓶（12ml 、1N HCl）。
8、使用說明書
注意事項
1．配套使用所提供的試劑，不要同其它公司的產品混用，不要將不同批次的產品混用。
2．樣品稀釋或含有雜質很可能對結果的準確性有影響。
3．不要使用過期的產品。
4．使用之前將所有試劑回升至室溫20-28ºC.不要在室溫放置超過24 小時。
5. 氟喹諾酮是抗生素，小心對待。
6. 停止液是1N 鹽酸，避免接觸皮膚。如果接觸請用大量的水沖洗。
7. 洗液是5X濃縮的，在使用時要用無離子水稀釋（如100ml洗液加400ml無離子水），用稀釋后的溶
液洗板
試劑盒未提供的材料
1、蒸餾水或無離子水
2、量筒100ml
3、燒杯（樣品提取和收集）
4、離心機
5、移液器50 μL
6、50 and 100 μL 8 道移液器
7、吸水紙
8、450nm 酶標儀
9、計時器
10. 攪拌器
11. SPE C18 Column 200mg/3mL
12. 乙腈
13. 乙腈
14. 洗瓶
15. 乙腈
16. HCl
17. 乙腈
18. 10 mM PBS, [0.31 g NaH2PO4-2H2O+ 2.87 g Na2HPO4-12H2O + 9 g NaCl,加無離子水定容到一升。
樣品處理
肉樣
1.勻漿化樣品。
2.在50ml的離心管中加入5克勻漿化的樣品，再加入10 ml乙腈
3.劇烈震蕩5分鐘
4.室溫3000轉離心5分鐘
5.取2ml上清液到一個干凈的玻璃試管中，用氮氣吹干。
6.然后加入2ml己烷，劇烈震蕩1分鐘，再加入2 mL10 mM PBS混勻。
7．室溫3000轉離心5分鐘。
8.移除上層液體。
9.把下層液體轉移到一個新的管中，待測。
蜂蜜樣品（1：2 稀釋）
1.在一個15ml 的帶螺旋蓋的玻璃瓶中加入1g 蜂蜜。
2.加入5 ml 1 M HCl 劇烈震蕩混勻。
3.室溫3000轉離心5分鐘。
4.用6ml 甲醇和6ml水前處理C18 柱。
5.把第三步驟的清澈的樣品萃取液過柱（flow rate: 15 drops/min）。
6.用3 ml 水和3 ml 5% 甲醇/水溶液洗柱。
7.用弱的氮氣流吹2 min清除殘留的水樣。
8.用5%的乙酸/甲醇溶液洗脫（flow rate: 15 drops/min）
9.用氮氣吹干洗脫液。
10.用2 ml 10 mM PBS 溶解干燥的萃取物，劇烈混勻。
11.待測，檢測結果乘以稀釋倍數2。
操作步驟
注意：標準和樣品做平行可以增加精密度和準確度
1、使用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來使其達到室溫。
2、從鋁箔袋中拿出要求數量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3、在對應的微孔中加入50μL 1：10 稀釋后的標準和樣品，確保吸頭要干凈。
4、每個測試孔都加入50 μL酶結合物
5、每個測試孔都加入50 μL抗體溶液
6、孵育30分鐘
7、孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加滿微孔然后倒掉，重復三次，總共四次洗板。
8、在zui后一次洗板后拍板，去掉殘留的洗液。
9、每個測試孔加入100μL底物。
10、孵育30分鐘
10、每個測試孔加入100μL終止液。
11、450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）。
結果分析
1．半定量結果的判定，可根據樣品的吸光度值與標準的吸光度值來判定，樣品的吸光度值低于某個標準
的吸光度值，則說明樣品的氟喹諾酮含量大于此標準的濃度，樣品的吸光度值高于某個標準的吸光度
值，則說明樣品的氟喹諾酮含量小于此標準的濃度。
2．定量結果判定，需要以標準的吸光度值為X軸，標準濃度的對數為Y軸繪制曲線圖，將標準濃度吸光
度值的點用直線連接，樣品的吸光度值也位于這條直線上，根據樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相
應樣品的濃度，如果樣品的吸光度值大于zui小標準的吸光度值或小于zui大標準的吸光度值，即可說明
此樣品中氟喹諾酮的含量小于0.2ppb 或大于16ppb。
