HCMEC細胞如何正確的轉染

　　常規(guī)轉染技術分為穩(wěn)定轉染（*轉染）和瞬時轉染兩類。穩(wěn)定轉染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。瞬時轉染則指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，一個宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其它調控元件的分析。

　　轉染方法不同，對轉染結果影響很大。常見的轉染方法有：

　　1.磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞原理得到瞬時或穩(wěn)定轉染結果，操作簡便但重復性差，不可用于原代細胞的轉染。

　　2.DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞，可用于瞬時轉染，方法相對簡便、結果可重復但對細胞有一定的毒副作用。

　　3.電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入。穩(wěn)定轉染，瞬時轉染均適用。適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，需根據不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件。

　　4.病毒介導法：通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中。適用于穩(wěn)定轉染，可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等。

　　5.陽離子脂質體法：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞從而形成穩(wěn)定轉染或瞬時性轉。該方法適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時需除血清。轉染效果隨細胞類型變化大。

　　6.顯微注射法：用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核，適用于穩(wěn)定轉染和瞬時轉染，轉染細胞數有限，多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞。

 

　　HCMEC細胞的注意事項如下：

　　1收到細胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們。

　　2對于貼壁細胞，若細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉；如細胞還不貼壁，將細胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

　　3建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和本公司技術部溝通交流。