PCR核酸檢測試劑盒的檢驗原理:
PCR核酸檢測試劑盒選取EB病毒基因組BamH1W基因設(shè)計特異性引物和探針,在樣本DNA核酸純化之后采用熒光PCR對病毒DNA進行檢測。
PCR核酸檢測試劑盒采用煮沸裂解法提取病毒DNA模板,然后在Taq酶的作用下對
靶區(qū)域進行擴增,同時利用Taqman熒光探針技術(shù)實時監(jiān)測擴增產(chǎn)物的累積。Taqman探針帶有一個熒光發(fā)光基團和一個熒光淬滅基團,完整的探針在特定光源激發(fā)下,發(fā)光基團所產(chǎn)生的熒光被淬滅基團全部吸收,樣品無熒光。PCR過程中,Taq酶在延伸DNA鏈的同時,可通過自身的5’→3’核酸外切酶活性降解與模板結(jié)合的特異性熒光探針,使熒光報告基團與淬滅基團分離,分離后的熒光報告基團在特定光源激發(fā)下產(chǎn)生熒光。通過監(jiān)測整個PCR過程熒光信號的變化,對未知模板進行定性分析。
同時PCR核酸檢測試劑盒采用內(nèi)標質(zhì)控體系,用于監(jiān)測反應(yīng)體系可能存在的抑制因素。內(nèi)標模板與靶基因無同源性,內(nèi)標探針選擇的是與靶基因探針沒有沖突的另一檢測通道。
注:1)不同批號試劑盒中各組分不可以互換。
2)PCR核酸檢測試劑盒以外必需的設(shè)備及材料:試劑盒以外必需的設(shè)備及材料:熒光定量PCR儀、旋渦混合器、生物安全柜、迷你離心機、干式恒溫儀或水浴鍋、移液器及無菌吸頭、離心機及無菌離心管、PCR反應(yīng)管、無粉乳膠手套。