客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Trichostrongylus spp. | 貨號 | YSP97308 |
熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
石蠟切片組織IL蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 DNAJC2/MPP11 ELISA Kit 100 ul 載玻片細(xì)胞IL蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 DAPK1 ELISA Kit 100 ul 冰凍切片組織IL蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 DOCK180 ELISA Kit 100 ul 石蠟切片組織IL蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 DPPA4 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞IL蛋白表達(dá)比色法定量檢測試劑盒 DCBLD2 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞IL蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 DCC(Netrin receptor DCC) ELISA Kit 20 ul IL蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 DcR2 ELISA Kit 100 ul IL蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 CTRP4 ELISA Kit 100 ul IL蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒 CST1 ELISA Kit 100 ul 細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 DDX3(DEAD box protein 3, X-chromosomal) ELISA Kit 100 ul 載玻片細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 ECM2 ELISA Kit 100 ul 冰凍切片組織ERK蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 DTX3L(E3 ubiquitin-protein ligase DTX3L) ELISA Kit 100 ul 石蠟切片組織ERK蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 E2F4 ELISA Kit 20 ul 載玻片細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 E2F7 ELISA Kit 100 ul 冰凍切片組織ERK蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 EDAR ELISA Kit 100 ul 石蠟切片組織ERK蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 EDC3 ELISA Kit 20 ul
通用探針法熒光PCR檢測試劑盒G蛋白偶聯(lián)受體γ14抗體Nogo-A Ab(Human Nogo-A antibody) ELISA Kit NOGO-A抗體100 ul 腸高血糖素相關(guān)肽抗體tTG-IgA(Human tissue transglutaminase IgA) ELISA kit 抗組織轉(zhuǎn)谷氨酰酶抗體IgA200 ul 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白10抗體Surv(Human Survivin antibody) ELISA Kit 抗存活素抗體/生存蛋白100µg 腸高血糖素相關(guān)肽抗體GM-CSF Ab(Human Granulocy-Macrophage Colony Stimulating Factor antibody) ELISA Kit 粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子抗體200 ul G蛋白偶聯(lián)受體120抗體TTN(Human titin Antibody) ELISA Kit 抗肌聯(lián)蛋白抗體400 ul G蛋白偶聯(lián)受體40抗體PsmAb(Human presynaptic membrane antibody) ELISA Kit 抗突觸前膜抗體100 ul 20號染色體開放閱讀框100抗體AT2R-Ab(Human Angionsin II Receptor 2 antibody) ELISA Kit 血管緊張素Ⅱ受體2抗體20 ul 促性腺素釋放激素受體2抗體AT II R1(Human angionsion II receptor 1 Antibody) ELISA Kit 血管緊張素Ⅱ受體1抗體100 ul G蛋白偶聯(lián)受體106抗體ANG- I R(Human angionsion I receptor Antibody) ELISA Kit 血管緊張素Ⅰ受體抗體20 ul
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 |
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