熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 有輪瑞氏絳蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Raillietina cesticillus | 貨號 | YSP97128 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 原鈣黏素22(PCDH22)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蘇云金芽胞桿菌 100g Zinedin蛋白(ZIN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 盤長孢狀刺盤孢 25g Vang樣蛋白2(VANGL2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 5g Marapsin蛋白(MPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 異常漢遜酵母 25g NeurabinⅠ蛋白(NRB1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 5g 載脂蛋白L5(APOL5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97%,含穩(wěn)定劑銅屑 大腸埃希菌 1g 載脂蛋白L4(APOL4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97%,含穩(wěn)定劑銅屑 桔青霉 25g Collybistin蛋白(CB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97%,含穩(wěn)定劑銅屑 小單孢菌 5g Epiprofin蛋白(Epfn)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 金黃色葡萄球菌 100g 含溴區(qū)PHD指蛋白1(BRPF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 麥根腐平臍蠕孢 25g 輔激活因子激活因子(COAA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 粉紅鐮刀菌 5g 含PR域蛋白10(PRDM10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 盔形畢赤酵母 100g 睪素3(TIC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 弗雷德里克斯堡假單胞菌 25g 鈣蛋白酶12(CAPN12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 單格孢屬 5g Fruitless蛋白(FRU)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 放射形根瘤菌 1g Heterotaxy 1蛋白(HTX1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 炭疽芽胞桿菌 25g 木酮糖酶同源物(XYLB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 短芽孢桿菌 5g 嗅蛋白(Olfactorin)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 小孢根霉寡孢變種 25g 有輪瑞氏絳蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒橋粒糖蛋白4抗體E.coli O6 (Escherichia coli O6) E.coli O6大腸桿菌菌體蛋白100 ul 酶動力蛋白3抗體EPEC/E.coli(enropathogenic E.coli,EPEC) 普通大腸埃希菌菌體蛋白(非致病性)500 ul δ連環(huán)蛋白/δ連環(huán)素/δ鏈接素(δ-canin)抗體EphA1 R(Ephrin A1 Receptor) EphA1-R受體抗原1 Kit 胞漿接頭蛋白Dok6抗體EPOR peptide 紅細胞生成素受體抗原100 ul 胞漿接頭蛋白Dok5抗體phospho-ERK1/MAPK-1/2(pThr183 + pTyr185) 酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗原100 ul 癌中心體相關(guān)蛋白抗體ERK(Extracellular signal-regulad kinase) 絲裂原活化蛋白激酶抗原1 Kit DCAF13蛋白抗體MAPK1/ERK3 (Mitogen-activad proin kinase 3; P44MAPK) 絲裂原活化蛋白激酶3抗原100 ul 原鈣粘蛋白16抗體MAPK4(Mitogen-activad proin kinase 4) 絲裂原活化蛋白激酶4抗原500µl 雌激素受體相關(guān)蛋白α抗體ER- Alpha(phospho-Ser167)peptide 酸化雌激素受體α多肽抗原100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |