熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 牛結節(jié)疹病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bovine Lumpy Skin Disease Virus(LSDV) | 貨號 | YSP96467 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 加拿大香脂PSMB8/LMP7 (D1K7X) Rabbit mAb甲氧基-酚 正己酸(>98%,BR)Camptothecin鹽酸莫西沙星 己內酰(>98%,BR)Phospho-GKAP (Ser346) AntibodyN,O-1,二乙?;胚?/span> 羧肽酶 Y >50 U /mgVAMP3 Antibody溴乙 蓖麻油MED26 Antibody基酸頻哪酯 1,1-環(huán)己基二乙酸PKCθ (E1I7Y) Rabbit mAb1,二甲基二甲 反式-1,2-環(huán)己二四乙酸(>98%,BR)STING (D2P2F) Rabbit mAb并咪唑-5-甲酸甲酯 乙酸纖維素Langerin (D9H7R) XP® Rabbit mAb2,6-二溴 乙酸鈰(>99%,BR)Langerin (D9H7R) XP® Rabbit mAb反式-1,環(huán)已烷二甲 硫酸鈰四水(>99%,BR)SimpleChIP® Human β-Actin Promor Primers2-溴-5-氟甲 碳酸銫(>99%,BR)Stathmin (D1Y5A) Rabbit mAb3,5-二氯異酸酯 滂天藍(~50%,BS)IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-rminal Antigen) (Pacific Blue™ Conjuga)環(huán)乙酸 氯銨-T三水(>98%,BR)VCAM-1 (E1E8X) Rabbit mAb一水右旋美沙芬 卡拉唑黑E(>70%,BS)ZO-1 (D6L1E) Rabbit mAb5-乙酰-2-氟 氯金酸三水PI3 Kinase p85α (6G10) Mouse mAb溴-5-氟-2- 氯鉑酸六水MMP-9 (D6O3H) XP® Rabbit mAb式醋酸鉛 乙酸膽固酯(>96%,BR)MMP-9 (D6O3H) XP® Rabbit mAb基-三氟甲基吡啶 硬脂酸膽固酯(>98%,BR)SimpleChIP® Human β-Actin 3' UTR Primers(S)-二甲基氨基- 牛結節(jié)疹病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒GRK2/BARK1 G蛋白偶合受體激酶2抗體100 ul 肝脂酶(HL)ELISA試劑盒GRIM19 干擾素/維甲酸誘導凋亡相關基因抗體100 ul 肝臟型脂肪酸結合蛋白(L-FABP)ELISA試劑盒GRM1 促代謝型谷氨酸受體1抗體100 ul 肝臟甘油三脂脂肪酶(HTGL)ELISA試劑盒GRM2/GLUR2 促代謝型谷氨酸受體2抗體100 ul 肝細胞生長因子受體(c-MET/HGFR)ELISA試劑盒Phospho-GRM2/GLUR2 (Tyr869/873/876) 酸化促代謝型谷氨酸受體2抗體100 ul 肝細胞生長因子激活物(HGFA)ELISA試劑盒Phospho-GRM2/GLUR2 (Tyr876) 酸化促代謝型谷氨酸受體2抗體100 ul 肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒GRM3 促代謝型谷氨酸受體M3抗體100 ul 肝細胞核因子1β(HNF-1B)ELISA試劑盒GRM4/mGluR4 促代謝型谷氨酸受體4抗體20 ul 肝素-血小板因子4復合物抗體(IgG)ELISA試劑盒GRM5/mGluR5 促代謝型谷氨酸受體5抗體100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |