產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。 產(chǎn)品名稱:牛副流感病毒型PCR檢測試劑盒規(guī)格 英文名稱:Bovine Parainfluenza Virus 3(BPIV3)3RTPCR 編號:HE30736-R 類別:PCR檢測試劑盒 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。 ? 儲需要自備的器材: 1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水 處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。 特點(diǎn): 1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。 2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。 3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。 保存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 α-鵝膏蕈堿 AMANITIN, a-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC) 包裝;5g 苦龍膽酯甙 ALYSSIN SULFONE(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;50mg ALYSSIN(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC) 包裝;1g ALYSSIN(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;5g 阿卓糖 ALTROSE, D-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;1g 山姜素 ALPINETIN(AS) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC) 包裝;5g 蘆薈甙 B ALOIN B(P) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;1g 蘆薈甙 B ALOIN B(P) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC) 包裝;250mg 4-對甲氧基苯甲酸 ANISIC ACID, 4-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;1g 3-甲氧基 ANISALDEHYDE, 3-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.5%(GC) 包裝;5g 2-甲氧基 ANISALDEHYDE, 2-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;25g 順-3,4-四二醇 ANHYDROERYTHRITOL,1,4-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.0%(HPLC) 包裝;5g 支鏈淀粉 AMYLOPECTINE(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%(GC) 包裝;100ml 4-氨基苯基-1-硫代-β-D-半乳糖苷 AMINOPHENYL-1-THIO-B-D-GALACTOPYRANOSIDE, 4-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,>99.0%(GC) 包裝;25ml 3-氨基素 AMINOCOUMARIN, 3-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC) 包裝;50MG 3-氨素 AMINOCOUMARIN, 3-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% 包裝;25g 4-氨基安替比林 AMINOANTIPYRINE, 4-(RG) 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;5g 牛副流感病毒型PCR檢測試劑盒規(guī)格 Candidatus Phytoplasma│ziziphi 中文名稱:棗瘋病植原體種屬:Candidatus Phytoplasma│ziziphi分離基物:婆棗提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25-28存儲條件:定期移植法 純度:92% Ralstonia│solanacearum (E. F. Smith) Yabuuchi et al. 中文名稱:茄拉爾氏菌種屬:Ralstonia│solanacearum (E. F. Smith) Yabuuchi et al.分離基物:莖干提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:28-30存儲條件:定期移植法 純度:97% Ganoderma│sp. 中文名稱:*黑芝(靈芝屬之一種)種屬:Ganoderma│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25存儲條件:定期移植法 純度:97% Pleurotus│cystidiosus O.K. Mill. 中文名稱:鮑魚菇種屬:Pleurotus│cystidiosus O.K. Mill.提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25存儲條件:定期移植法 純度:98% Cryphonectria│parasitica (Murrill) M. E. Barr 中文名稱:栗疫菌種屬:Cryphonectria│parasitica (Murrill) M. E. Barr分離基物:根莖提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:27存儲條件:定期移植法 純度:98% Melanconium│oblongum Berk. 中文名稱:矩圓黑盤孢種屬:Melanconium│oblongum Berk.分離基物:枝干病斑提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25-27存儲條件:定期移植法 純度:96% Phytophthora│cinnamomi Rands 中文名稱:樟疫霉種屬:Phytophthora│cinnamomi Rands分離基物:根系提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25-27存儲條件:定期移植法 純度:96% Mortierella│sp. 中文名稱:*被孢霉屬種屬:Mortierella│sp.分離基物:菌絲體提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:松茸附生菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25-30存儲條件:定期移植法 純度:96% 反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。 技術(shù)原理: DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。 在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性) 產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。 |