熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 卡他莫拉菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Moraxella catarrhalis | 貨號 | YSP96930 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 TUBA1C 英文名稱: 微管相關(guān)蛋白α6抗體 0.1ml C1orf112 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框112抗體 0.2ml Anti-Claudin 4 緊密連接蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml phospho-E2F1 (Thr433) 英文名稱: 酸化轉(zhuǎn)錄因子E2F1抗體 0.1ml 抑制基因抗體 Anti-Nm23-H1 0.1ml Anti-Phospho-SHIP2 (Tyr986/987) /FITC 熒光素標記酸化蛋白酪氨酸酸酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Phospho-p56Dok2(Tyr142) 酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml BRP44 英文名稱: 腦蛋白44抗體 0.2ml Anti-RASSF1A Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml VGCC(Human voltage-gated calcium channel) ELISA Kit 人鈣離子通道抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-Phospho-Pin1 (Ser16) 酸化肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml Rhesus antibody Rh HIPK4 同源相互作用蛋白激酶4抗體 規(guī)格 0.2ml RANKL ELISA Kit 大鼠核因子κB受體活化因子配基 96T PILR beta 英文名稱: 細胞表面受體PILRβ抗體 0.2ml 附500克Iodophor炭疽桿菌檢測用配套試劑 Campy-Cefex添加劑2毫升×10支Campy-Cefex Supplement添加于200ml CAMPY-CEFEX瓊脂基礎(chǔ)中 多項目尿液化學分析控制品10毫升×6支多項目尿液化學分析控制品 化高鐵血紅蛋白參比液(100g/L)10毫升×8支Cyanomethemoglobin reference solution 化高鐵血紅蛋白參比液(150g/L)10毫升×8支Cyanomethemoglobin reference solution 化高鐵血紅蛋白參比液(4種×2套)10毫升×8支Cyanomethemoglobin reference solution 卡他莫拉菌探針法熒光PCR檢測試劑盒鈣結(jié)合蛋白樣39抗體PD-1/FITC 熒光素標記程序性死亡1抗體IgG100 ul 癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子3抗體PDCD4/FITC 熒光素標記凋亡相關(guān)蛋白4抗體IgG100 ul 20號染色體開放閱讀框31抗體TFAR19/PDCD5 /FITC 熒光素標記凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體IgG100 ul 成簇相關(guān)蛋白1抗體PDE4D/FITC 熒光素標記酸二酯酶4D抗體IgG100 ul 腫瘤/抗原2抗體PDEF/FITC 熒光素標記上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG100 ul 腫瘤/抗原1BPDGF-A/FITC 熒光素標記血小板源性生長因子-A抗體IgG100 ul 皮膚T細胞淋巴瘤相關(guān)抗原5抗體(腦膜瘤表達抗原6)PDGF-B/FITC 熒光素標記血小板源性生長因子-B抗體IgG100 ul 腫瘤/抗原3抗體PDGF-BB/FITC 熒光素標記血小板源性生長因子-BB抗體IgG100 ul 腦多巴神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體PDGF-R-A/FITC 熒光素標記血小板源性生長因子受體-A抗體IgG100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |