特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 嗜人錐蠅探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cochliomyia hominivorax | 貨號 | YSP96574 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 (0.105mg/ml)Argonau 2 (C34C6) Rabbit mAb5-羥基吡-2-羧酸甲酯 (10μg/ml,u=6~5%,酮)Argonau 2 (C34C6) Rabbit mAbFmoc-L-賴氨酸鹽酸鹽 敵稗標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)Bim (C34C5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjuga)三氟甲氧基酸 伏殺硫(標(biāo)準(zhǔn)品)CTCF Antibody2-溴-5-基吡啶 伏殺硫標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7~3%,酮)Phospho-YB1 (Ser102) (C34A2) Rabbit mAb溴異煙酸 克螨特標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/ml)IQGAP1 (D6E3J) Rabbit mAb氨基二 三氯殺蟲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)Di-Methyl-Histone H3 (Lys36) (C75H12) Rabbit mAb環(huán)磺酰氯 三氯殺蟲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)Di-Methyl-Histone H3 (Lys36) (C75H12) Rabbit mAb5-(2-乙氧基)-1-甲基-基-1,6-二氫-7H-吡唑并[4,D]嘧啶-7-酮 霜霉威(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)Phospho-PLCbeta3 (Ser537) (D8K2R) Rabbit mAb兩性霉素 B 多氯聯(lián)(Aroclor 1248)標(biāo)樣(100μg/mL,基體:甲)ASF1B (C70E2) Rabbit mAb氟-2-酸 多氯聯(lián)(Aroclor 1221)標(biāo)樣(100.0μg/mL,基體:甲)p70 S6 Kinase Substras Antibody Sampler Kit5-溴-2-甲氧基嘧啶 多氯聯(lián)(Aroclor 1242)標(biāo)樣(100μg/mL,基體:甲)Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb基胍碳酸鹽 多氯聯(lián) (Aroclor 1254)標(biāo)樣(100μg/mL,基體:甲)VEGF Receptor 2 Control Proins三乙酰酮鐵 甲基毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6~4%,酮)IKKε (D20G4) Rabbit mAbN-氨乙基哌 解毒喹(標(biāo)準(zhǔn)品)IKKε (D20G4) Rabbit mAb羧基酸 綠麥隆標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)Pim-1 Antibody鹽酸萬古霉素 氯丹農(nóng)藥溶液(基體:異辛烷)PhosphoPlus®α-Synuclein (Ser129) Antibody Duet硫酸多粘菌素 B 敵草隆(99%)SBI-0206965氯代二酸二乙酯 嗜人錐蠅探針法熒光PCR檢測試劑盒牛甜菜-同型半胱氨酸S-甲基轉(zhuǎn)移酶1(BHMT)ELISA試劑盒Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261) 酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體100 ul 牛胎盤生長因子(PGF)ELISA試劑盒Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261) 酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體100 ul 牛羧化不全骨鈣素(ucOC)ELISA試劑盒MEK6 絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體100 ul 牛雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒Phospho-MEK6 (Ser207) 酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體300 ul 牛瘦素(LEP)ELISA試劑盒Phospho-MEK6 (Ser202) 酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體100 ul 牛生長抑素(SS)ELISA試劑盒MKK7/ERK7 絲裂原活化蛋白激酶MKK7抗體100 ul 牛生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒Phospho-MKK7 (Ser271/Thr275) 酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK7抗體20 ul 牛生長激素(GH)ELISA試劑盒P53(wt-p53) 腫瘤抑制基因抗體(野生型P53)100 ul 牛腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒P53(wt-p53) 腫瘤抑制基因抗體(野生型P53)300 ul |