熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來(lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 肝胰腺壞死性細(xì)菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Necrotizing Hepatopancreatitis Bacterium(NHPB) | 貨號(hào) | YSP96992 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 Flk-1/KDR/VEGFR2 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝 Uromucoid 英文名稱: 尿調(diào)節(jié)蛋白抗體 0.1ml CCL15 英文名稱: 巨噬細(xì)胞炎性蛋白15 0.1ml Anti-BIN1 橋連整合因子蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml EMR1 英文名稱: 表皮生長(zhǎng)因子樣激素受體1 0.2ml 腱糖蛋白-C抗體 anti-Tn-C 0.2ml Anti-TNF- Alpha /HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗人壞死因子-α單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml C16orf7 英文名稱: 16號(hào)染色體開放閱讀框7抗體 0.2ml ELISA試劑盒英文名稱:Rat leukotriene E4,LT-E4 ELISA Kit* 大鼠白細(xì)胞活化黏附因子香receptor,PROGR ELISA Kit 大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒 進(jìn)口/原裝 英文名稱: Rat apoprotein A1,apo-A1 ELISA Kit 大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 進(jìn)口/原裝 英文名稱: Rat apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit 雞補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken Complement 3 split product,C3SP ELISA Kit 進(jìn)口/分裝 雞層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒 英文名稱:Chicken Laminin,LN ELISA Kit 進(jìn)口/原裝 雞傳染性鼻炎抗體(IC)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken infectious coryza,ic ELISA Kit* 雞促黃體激素(LH)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken Luteinizing Hormone,LH ELISA Kit進(jìn)口/分裝 雞促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit * 雞催乳素(PRL)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken prolactin,PRL ELISA Kit進(jìn)口/原裝 人E-選擇素G98T基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒(PCR-RLFP)低溫運(yùn)輸,-20℃保存50T 人Dectin-1基因PCR檢測(cè)試劑盒低溫運(yùn)輸,-20℃保存50T 人CYP17基因多態(tài)性檢測(cè)試劑盒(PCR-RLFP)低溫?Anti-NSE 神經(jīng)元特異性烯醇化酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml FS(Human Follistatin) ELISA Kit 人卵泡抑素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) 酸化單絲氨酸蛋白激酶1/2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml Rhesus antibody Rh KLK12 激肽釋放酶12抗體 規(guī)格 0.1ml 6-keto-PGF1a(Human 6-keto-prostaglandin F1a) ELISA Kit 人6酮前列腺素F1a 96T PTGEs 英文名稱: 前列腺素E合成酶抗體 0.1ml 真核翻譯啟動(dòng)因子4A 單克隆抗體eIF4A1 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 纖維連接蛋白 單克隆抗體Fibronectin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul GST 單克隆抗體GST Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul Cleaved PARP 單克隆抗體Cleaved PARP Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul α骨骼肌肌動(dòng)蛋白 單克隆抗體α skeletal muscle actin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul β II 微管蛋白 單克隆抗體β II tubulin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 肝胰腺壞死性細(xì)菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體TNF-alpha/ TNF- Alpha /FITC 熒光素標(biāo)記鼠抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體 IgG100 ul 后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體TNF- Beta/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子-β抗體IgG100 ul 酸化CRK抗體TNFAIP1/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體IgG100 ul 鈣粘蛋白6抗體TNFAIP3 /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3抗體IgG100 ul 鈣粘蛋白23抗體TNFSF14/LIGHT/CD258/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子配體超家族成員14抗體IgG100 ul 小腦變性相關(guān)蛋白2抗體TNFSF4/CD252/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子配體超家族成員4抗體IgG1 Kit 細(xì)胞分裂周期2相關(guān)蛋白激酶7抗體TNFSF18/GITR Ligand/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤壞死因子配體超家族成員18抗體IgG100 ul A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)TNF- Alpha /HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記腫瘤壞死因子抗體IgG20 ul 酸化細(xì)胞角蛋白18抗體TNF- Alpha /HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體IgG100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 |