特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 蝦肝腸微胞蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Enterocytozoon hepatopenaei(EHP) | 貨號 | YSP96666 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 鹽酸馬尼地平Rab10 Antibody2-酰氯 鹽酸馬尼地平(標(biāo)準(zhǔn)品)PI3 Kinase Class III (D9A5) Rabbit mAbD-溴氨酸 二氫睪酮,雄諾龍F(tuán)XR1 (L662) Antibody甲巰脯酸 多拉菌素STOP (175) Mouse mAb2,二甲基吡咯 3,3,5-三-L-甲狀腺原氨酸,塞羅寧SOD1 (71G8) Mouse mAb甲氧基芐硫 Corylifol A(標(biāo)準(zhǔn)品)SOD1 (71G8) Mouse mAb2,5-二甲基呋喃 溴芬酸鈉EGF Receptor (D38B1) XP® Rabbit mAb氯氟 溴芬酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)EGF Receptor (D38B1) XP® Rabbit mAb間氯 鹽酸氟哌噻噸EGF Receptor (D38B1) XP® Rabbit mAb間二甲 茶多酚;綠茶提取物Fer (5D2) Mouse mAb1,3,5-三溴 四氫姜黃素 Ron (1B5) Mouse mAb2,二羥基-6-甲基嘧啶 管花苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)Non-phospho (Active) β-Canin (Ser33/37/Thr41) Antibody甲基哌啶 2’-乙?;锘ㄌ擒?標(biāo)準(zhǔn)品)THEM2 AntibodyN-甲基哌啶 2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)氧基]乙基溴 WASP (D9C8) Rabbit mAbL-高胱氨酸 吡咯喹啉醌;維生素Cytochrome c Antibody己二酸單乙酯 吡咯喹啉醌二鈉鹽;維生素Q鈉鹽Cytochrome c Antibody1-(基)哌 鹽酸右美托咪定CDK4 (D9G3E) Rabbit mAb (PE Conjuga)氯甲酸氯乙酯 地夫可特ATP2A1/SERCA1 (A988) Antibody溴-1- 蝦肝腸微胞蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒VTG 魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體300 ul 白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒VWF 血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體100 ul 白介素15(IL-15)ELISA試劑盒V.cholera Ogawa 01群稻葉型霍亂弧菌抗體300 ul β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒V.cholera Ogawa 01群小川型霍亂弧菌抗體100 ul α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒WEE1 proin WEE1蛋白抗體300 ul Tau蛋白ELISA試劑盒Phospho-Wee1 (Ser642) 酸化WEE1蛋白抗體100 ul N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒WNK1 賴氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體100 ul 猴腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒Phospho-WNK1 (Thr60) 賴氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體300 ul 猴脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒WNK4 WNK4抗體100 ul |