客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
苊（標準品）Carfilzomib2-巰基-5-氯并噻唑

二乙基與乙基磺酸鈉的聚合物His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)并噻唑-2-甲

二胍（標準品）ROS1 (D4D6®) Rabbit mAb (HRP Conjuga)N-甲基吲哚

1乙?；?9-羥基巴卡丁III（標準品）YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)5-甲基-6,7-二氫-5H-環(huán)戊并吡

(+)-冰片（標準品）Neurofascin 186 (D6G6O) Rabbit mAb甲氧基甲甲酸酯

乙酸龍腦酯（標準品）Neurofascin 155 (D7B6O) Rabbit mAb2,2,三溴

二氫丹參酮（標準品）Neurofascin 155 (D7B6O) Rabbit mAb1,雙(2,二氨基氧基)烷

銻標準溶液（1000μg/ml,基體:6.0 mol/L HCl）Cre Recombinase (D7L7L) XP® Rabbit mAb三氟甲氧基乙酰

銻標準溶液（1000μg/ml,,溶劑：鹽酸）Cre Recombinase (D7L7L) XP® Rabbit mAb7-氮雜并三唑-1-基氧基三(二基)膦六氟酸鹽

銻標準溶液（100mg/L,溶劑:1%鹽酸）Lamin B1 (D9V6H) Rabbit mAb (HRP Conjuga)2-溴-4,5-二氟甲酸甲酯

銻標準溶液（100mg/L(20℃), 基體: 20%HCl）HER3/ErbB3 (D22C5) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)(R)-1-Boc-氨甲基哌啶

銻標準溶液（分析標準品,1.24±0.26mg/L）His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)氨基乙.硫酸鹽

砷標準溶液（1000μg/ml,溶劑:1mol/L硝酸）Bcl-2 (124) Mouse mAb氨基-羧基乙氧基吡唑

砷標準溶液（100mg/L,溶劑：微量硫酸）Bcl-2 (124) Mouse mAb(甲基哌-1-基)甲

砷標準溶液（100µg/mL,基體：1%HNO3）DDX41 (D3F1Z) Rabbit mAb氯-2,二氟

砷標準溶液（0.500μg/g,基體:0.2%(v/v)H2SO4,K+2.2mg/L,Na+23mg/L,Cl-37mg/L）PathScan® Total FGF Receptor 4 Sandwich ELISA Kit三氟甲基-2-羥基喹啉

標準溶液（1000μg/ml,溶劑：水）DMT1/SLC11A2 (D3V8G) Rabbit mAb5-氯-2,二甲氧基

標準溶液（100µg/mL,基體：水）HRS (D7T5N) Rabbit mAb2-氟-甲酸乙酯
白色念珠菌探針法熒光PCR檢測試劑盒補體蛋白4(C4)ELISA試劑盒IL-21  白介素21抗體100 ul

補體蛋白3(C3)ELISA試劑盒IL-21R  白介素21受體抗體100 ul

補體C1q腫瘤壞死因子相關蛋白1(C1QTNF1/CTRP1)ELISA試劑盒IL-22  白介素-22抗體100 ul

補體7(C7)ELISA試劑盒IL-22R  白介素-22受體抗體100 ul

補體3裂解產(chǎn)物(C3SP)ELISA試劑盒IL-22BP/IL22RA2  白介素22受體結合蛋白抗體100 ul

補體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)ELISA試劑盒IL1RAPL1  白介素1受體相關蛋白樣1前體蛋白抗體100 ul

補體1抑制物抗體-IgG(C1INH-IgG)ELISA試劑盒IL-26/AK155  白介素26抗體20 ul

補體1q(C1q)ELISA試劑盒IL-28A/IFNL2  白細胞介素28A抗體100 ul

玻連蛋白(VTN)ELISA試劑盒IL-28B/IL-28C  白細胞介素28B抗體20 ul
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。