熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 海藻巴斯德菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Pasteurella trehalosi | 貨號 | YSP97052 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
趨化因子C-基元配體2(XCL2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 孟氏假單胞菌 25g 羧肽酶A3(CPA3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 麥根腐平臍蠕孢 5g 肌苷三酸酶(ITPA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 灰葡萄孢菌* 1g Persephin蛋白(PSPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 球孢白僵菌 25g 平足蛋白(PDPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 克魯斯假絲酵母 5g 半胱氨酸豐富血管生成誘導因子61(CYR61)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 熒光級,≥95% (HPCE) 桑炭疽刺盤菌 250mg 羧肽酶A3(CPA3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 乳酸乳球菌乳亞種 100g 卵泡刺激素受體(FSHR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 粉擬青霉 25g 骨骼肌慢肌肌鈣蛋白I(TNNI1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑色附球孢菌 5g 骨骼肌慢肌肌鈣蛋白I(TNNI1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98%(HPLC) 鼠李糖乳桿菌 1g 血小板衍生生長因子C(PDGFC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98%(HPLC) 布蘭克假絲酵母 5g 激肽釋放酶9(KLK9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 細黃鏈霉菌乳糖變種 1g 賴氨酰氧化酶(LOX)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蠟狀芽孢桿菌 5g 皮膚橋蛋白(DPT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 羊泰勒蟲（臨潭株-1） 1g 骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 巴斯德畢赤酵母 250mg 骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蠟樣芽孢桿菌 25g 鋅結合α2-糖蛋白1(αZGP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 葡萄座腔菌 5g RAS癌基因家族成員RAB37(RAB37)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% Myxococcus sp. 1g
海藻巴斯德菌探針法熒光PCR檢測試劑盒4號染色體開放閱讀框46抗體pig IgG (親和純化) 豬IgG300 ul 4號染色體開放閱讀框51抗體pig IgM (親和純化) 豬IgM100 ul 分支酶GBE1抗體Mink IgG 貂IgG (親和純化)300 ul 酸化絲切蛋白抗體Rabbit IgG 兔IgG(親和層析純化)500µl 補體成分5受體1抗體Rabbit IgM (親和純化) 兔IgM300 ul 細胞分裂周期2樣蛋白激酶6抗體Rat IgG (親和純化) IgG300 ul 補體C3IP1抗體Rat IgM (親和純化) IgM100 ul 酸化細胞周期檢測點激酶2抗體 特級胎牛血清300 ul 周期素依賴性激酶11抗體 優(yōu)級胎牛血清300 ul |
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