特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 馬可尼小囊蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mikrocytos mackini | 貨號 | YSP96921 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 ASAP1 英文名稱: 發(fā)育分化增強因子1抗體 0.1ml Anti-AMPK beta-1(phospho Ser108) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠酸化腺苷單酸活化蛋白激酶β1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml SHBG(Mouse sex hormone-binding globulin) ELISA Kit 小鼠性激素結(jié)合球蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-CD177/FITC 熒光素標記CD177抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Donkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的驢抗人IgG 規(guī)格 0.1ml RBC(Rat anti-red cell antibody )ELISA Kit 大鼠抗紅細胞抗體 96T MHC Class II 英文名稱: 組織相容性復(fù)合體2抗體 0.1ml BRCC4 英文名稱: 癌易感基因復(fù)合蛋白4抗體 0.2ml Anti-phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) 酸化原癌基因c-Raf抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml EHF(Human anti-epidemic hemorrhagic fever virus IgM antibody) ELISA Kit 人抗流行性出血熱病毒抗體IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-IRF7 干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh LGR4/GPR48 G蛋白偶聯(lián)受體48抗體 規(guī)格 0.1ml Beta-CG(Human Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit 人絨毛膜促性腺激素β 96T p53BP1 英文名稱: p53結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml 甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基250克Mannitol Ferment Medium腸道桿菌的鑒別,細菌甘露醇發(fā)酵試驗 普通肉湯瓊脂平板50塊Nutrient Agar Plate一般細菌的培養(yǎng)和細菌總數(shù)的測定 M-H瓊脂平板10塊M-H Agar Plate 沙保弱氏瓊脂平板10塊沙保弱氏瓊脂平板 克氏鐵瓊脂斜面平板10支KIA Plate 弧菌選擇瓊脂平板10塊TCBS Agar Plate 馬可尼小囊蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒細胞粘附分子4抗體ox-LDL/FITC 熒光素標記抗氧化低密度脂蛋白抗體IgG100 ul 鈣調(diào)蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體OXR /FITC 熒光素標記整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體IgG100 ul 周期素依賴性激酶5激活結(jié)合蛋白C53抗體Oxytracycline/FITC 熒光素標記土霉素抗體IgG100 ul 著絲粒蛋白H抗體P2P-R/RBBP6 /FITC 熒光素標記增殖潛能相關(guān)蛋白抗體IgG100 ul 半胱氨酸蛋白酶抑制劑6抗體P2Y1 receptor/FITC 熒光素標記P2Y1受體抗體IgG100 ul 碳酸酐酶相關(guān)蛋白/腦蛋白10抗體P2Y4 receptor/P2ry4 /FITC 熒光素標記P2Y4受體抗體IgG1 Kit 白細胞介素-18受體α鏈抗體P14ARF/FITC 熒光素標記抑癌基因p14抗體IgG1 Kit 轉(zhuǎn)錄阻抑蛋白CTCF抗體P16/FITC 熒光素標記兔抗抑癌基因p16抗體IgG100 ul T淋巴細胞CD1抗體P19ARF/FITC 熒光素標記p19ARF抑癌基因抗體IgG100 ul |