產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。 產(chǎn)品名稱(chēng):腦膜蠕蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格 英文名稱(chēng):Parelaphostrongylus teniusPCR 編號(hào):HE31352-R 類(lèi)別:PCR檢測(cè)試劑盒 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。 ? 儲(chǔ)需要自備的器材: 1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水 處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。 特點(diǎn): 1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。 2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。 3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。 保存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 膜封閉液 100ml 英文名稱(chēng) Western Blocking Buffer儲(chǔ)存條件 2-8℃,有效期1個(gè)月產(chǎn)品簡(jiǎn)介: Western Blot 膜封閉液(Blocking Buffer)適用于 Western Blot 實(shí)驗(yàn)中 PVDF 膜或 NC 膜等轉(zhuǎn)印膜的封閉。封 閉后,可以減小后續(xù)的一抗或二抗和膜的非特異性結(jié)合,降低背景,增強(qiáng)信噪比,以達(dá)到理想的顯色效果。 按照每張膜封閉需要 5-10 毫升封閉液計(jì)算,一個(gè)包裝的 Western 封閉液可以封閉 10-20 張膜?!∈褂梅椒ǎ骸”井a(chǎn)品為即用型,無(wú)需稀釋。蛋白轉(zhuǎn)膜后將轉(zhuǎn)印膜置于容器中,加入足夠量的膜封閉液充分覆蓋膜,室 溫下振蕩封閉半小時(shí)至 1 小時(shí),即完成膜的封閉,然后進(jìn)行一抗孵育等后續(xù)操作?!?/span> 藍(lán)色預(yù)染次高分子量蛋白質(zhì)Marker(43-200kDa) 10T 英文名稱(chēng) Prestained Protein Marker(43kD-200kD)儲(chǔ)存條件 -20℃,有效期1年。避免反復(fù)凍融,建議分裝后于-20℃保存產(chǎn)品簡(jiǎn)介:本產(chǎn)品包含5種預(yù)染的已知分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì),分子量范圍為43kD-200kD,條帶分別為:43,66.2,97.4,130,200??梢灾苯佑^察蛋白質(zhì)電泳及清晰地判斷Western Blot的轉(zhuǎn)移效果。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳后轉(zhuǎn)移到PVDF或NC膜上可得到清晰的5條藍(lán)色的蛋?!∈褂谜f(shuō)明: 1.開(kāi)封后,可根據(jù)需要分裝成小管,建議每管分裝10μl,-20℃貯存,每次取一管使用?!?.本產(chǎn)品已經(jīng)含有了上樣緩沖液,使用前取分裝后的小管65℃預(yù)熱5分鐘即可上樣進(jìn)行電泳,上樣量5-10μl?!?.建議分離膠濃度為8%?!?/span> 彩虹130廣譜蛋白marker(15-130KD) 20T(100ul) 別名 預(yù)染彩虹蛋白marker英文名稱(chēng) ColorMixed Protein Marker(15-130KD)儲(chǔ)存條件 -20℃,有效期2年單位 支彩虹130廣譜蛋白marker說(shuō)明書(shū) 貨號(hào): PR1950 規(guī)格: 20T (100μL)/50T(250μL) /100T(250μL×2) /500T(250μL×10) 保存: -20℃保存,有效期至少2年?!‘a(chǎn)品特點(diǎn): l 三色預(yù)染,顏色鮮亮,條帶整齊,便于觀察?! 用量少,節(jié)約成本,僅5ul即可完美呈現(xiàn)(1.5mm,10孔梳)?! 廣譜多帶,一支即可滿足多種實(shí)驗(yàn)需求?!‘a(chǎn)品簡(jiǎn)介: 本產(chǎn)品包含9種彩色預(yù)染的已知分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白,分子量范圍為15kD-130kD,每種蛋白含量約為0.2-0.4mg/ml。預(yù)染marker可以用于直接觀察蛋白質(zhì)電泳狀況以及清晰地判斷Western Blot的轉(zhuǎn)膜效果。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳或轉(zhuǎn)移到PVDF或NC膜上可得到清晰的9條彩色蛋白條帶,其中70kD條帶為紅色,25kD條帶為綠色,其余條帶為藍(lán)色?!?/span> 熒光蛋白上樣緩沖液 100ul 別名 立顯蛋白電泳條帶顯色劑 蛋白熒光buffer 熒光上樣緩沖液英文名稱(chēng) Band-Now Pre-Staining Protein Sample Treatment Buffer for SDS-PAGE儲(chǔ)存條件 -20℃熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對(duì)SDS-PAGE的蛋白樣品進(jìn)行預(yù)染,標(biāo)記上熒光。實(shí)驗(yàn)完成以后,凝膠中或轉(zhuǎn)膜后的蛋白條可直接通過(guò)紫外燈、LED燈或其他數(shù)字成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察和分析,無(wú)需染色脫色。 熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩(wěn)定性強(qiáng),背景低??蓪?duì)所有蛋白進(jìn)行染色,不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過(guò)程中,游離的染料分子與溴酚藍(lán)的遷移速率一致,跑膠結(jié)束時(shí) 移至凝膠末端,背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達(dá)純化以及Western blot的SDS-PAGE。 使用步驟 1 請(qǐng)?jiān)谑褂们案鶕?jù)管壁標(biāo)簽上的體積加入resuspension buffer重懸。Resuspension buffer在4℃可能會(huì)有沉淀產(chǎn)生,室溫下放置至沉淀消失。2 將用上樣緩沖液處理的蛋白樣品與待電泳蛋白樣品1:2混合。比如,3ul 上樣緩沖液 + 6ul 蛋白樣品。3 90-100℃加熱上述處理的樣品混合液5分鐘。細(xì)胞或組織樣品,加熱時(shí)間延長(zhǎng)至10分鐘。確保加熱溫度>90℃使樣品充分受熱。Ÿ 大部分預(yù)制膠(Bis-Tris體系除外)可以直接進(jìn)行下一步。Bis-Tris體系的預(yù)制膠(如Life Technology),需加入20%已處理樣品體積的Enhancing buffer。比如,10ul已處理的樣品需加入2ul Enhancing buffer。4 樣品可以上樣進(jìn)行電泳了(無(wú)需再加Loading Buffer處理)。5 電泳結(jié)束后,將凝膠放至透射儀上進(jìn)行觀察和拍照。透射儀可以是紫外燈,藍(lán)光LED燈或其它凝膠成像系統(tǒng)。如果光源在可見(jiàn)光波長(zhǎng)范疇的無(wú)需剝膠,因?yàn)榭梢?jiàn)波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光可以穿透玻璃或塑料材質(zhì)的膠板。6?。蛇x的)如果有需要,經(jīng)熒光蛋白上樣緩沖液處理的凝膠仍可進(jìn)行考染。按標(biāo)準(zhǔn)的考染步驟進(jìn)行即可。 低分子量LMW Calibration Kit(14.4-97.4KDa) 575ug 儲(chǔ)存條件 2-8℃產(chǎn)品用途:蛋白質(zhì)電泳Marker 腦膜蠕蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格 磷化腺苷單磷活化蛋白激酶α2抗體Norglaucine hydrochloride別名: 分子式: C20H24ClNO4性狀: Powder純度: 98.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 阿樸啡生物堿;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫(kù) 性神經(jīng)酰酶1抗體Glycosolone別名: 分子式: C16H19NO3性狀: Powder純度: 98.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 山小橘;喹啉酮;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫(kù) 粘附調(diào)節(jié)分子1抗體Methyl L-pyroglutama別名: 分子式: C6H9NO3性狀: Oil純度: 特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 吡咯生物堿;中藥對(duì)照品;中藥標(biāo)準(zhǔn)品;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫(kù) 氣味結(jié)合蛋白抗體10-Hydroxyneoline別名: 分子式: C24H39NO7性狀: Powder純度: 特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 烏頭屬;烏頭生物堿;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫(kù) 乙醛脫氫酶2抗體Carmichaenine C別名: 分子式: C30H41NO7性狀: Powder純度: 97.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫(kù) 膜粘連蛋白10抗體2-Ethyl-2,6,6-trimethylpiperidin-4-one別名: 分子式: C10H19NO性狀: Oil純度: 特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫(kù) 前梯度同源蛋白2抗體Songorine別名: 分子式: C22H31NO3性狀: Powder純度: 98.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: GABA受體拮抗劑;烏頭屬;烏頭生物堿;中藥對(duì)照品;中藥標(biāo)準(zhǔn)品;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫(kù) 乙醛脫氫酶5抗體Carmichaenine E別名: 分子式: C31H43NO8性狀: Powder純度: 97.5%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫(kù) 反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。 引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。 技術(shù)原理: DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。 在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性) 產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。 |