PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩?lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 產(chǎn)品名稱 | 滑液支原體探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Mycoplasma synoviae | 貨號(hào) | YSP96988 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! ATP2c1 英文名稱: 鈣離子ATP酶通道蛋白抗體 0.2ml Anti-TNF-alpha 壞死因子-α抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml GATA4 ELISA Kit muman 人GATA結(jié)合蛋白4 ELISA試劑盒Multi-class antibodies規(guī)格: 96T Anti-STAT1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml Rhesus antibody Rh Goat Anti-human IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格 0.1ml iNOS(Mouse inducible nitric oxide synthase) ELISA Kit 小鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶 96T NDUFS3 英文名稱: 線粒體復(fù)合物NDUFS3蛋白抗體 0.2ml C15orf52 英文名稱: 15號(hào)染色體開放閱讀框52抗體 0.2ml Anti-IL-2 白細(xì)胞介素-2單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml bFGF(Human basic fibroblast growth factor) ELISA Kit 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Dicaffeoylquinic acid32451-88-020mgHPLC≥98% 異牡荊苷;異牡荊素;皂草素,皂草黃素,石堿草素,異牡荊黃素Isovitexin29702-25-820mgHPLC≥98% 異歐前胡素;白芷甲素?、異歐芹屬素乙Isoimperatorin482-45-120mgHPLC≥98% 異嗪皮啶;異秦皮啶Isofraxidin486-21-520mgHPLC≥98% 異去氫鉤藤堿;異柯諾辛因堿Isocorynoxeine51014-29-020mgHPLC≥98% 大鼠抑制素結(jié)合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒 進(jìn)口/原裝 英文名稱: Rat Inhibin binding protein,INHBP ELISA Kit 大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒 進(jìn)口/原裝 英文名稱: Rat Helicobacter pylori IgG,Hp-IgG ELISA Kit 大鼠游離β絨毛膜促性腺激素(f-βCG)ELISA試劑盒 進(jìn)口/原裝 英文名稱: Rat free chorionic gonadotropin,f-βCG ELISA Kit 大鼠游離睪酮(F-TESTO)ELISA試劑盒 進(jìn)口/原裝 英文名稱: Rat Free Testoterone,F-TESTO ELISA Kit 大鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒 進(jìn)口/原裝 英文名稱: Rat Free ?Anti-G-CSFR 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml ANG-2(Human Angiopoietin 2) ELISA Kit 人血管生成素2 96T phospho-c-Raf(Ser296) 英文名稱: 酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml 細(xì)胞角蛋白 18 單克隆抗體Cytokeratin 18 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 細(xì)胞角蛋白 18 單克隆抗體Cytokeratin 18 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Mono Methyl Lys79) 單克隆抗體(1C2)Histone H3 (Mono Methyl Lys79) Monoclonal Antibody(1C2)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Mono Methyl Lys79) 單克隆抗體(1E10)Histone H3 (Mono Methyl Lys79) Monoclonal Antibody(1E10)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Tri Methyl Lys9) 單克隆抗體(2C3)Histone H3 (Tri Methyl Lys9) Monoclonal Antibody(2C3)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Di Methyl Lys27) 單克隆抗體(3B12)Histone H3 (Di Methyl Lys27) Monoclonal Antibody(3B12)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 滑液支原體探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體RARRES1/TIG1/FITC 熒光素標(biāo)記視黃酸受體應(yīng)答蛋白1抗體IgG100 ul 皮質(zhì)素1抗體TIGAR humen/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗TIGAR蛋白抗體IgG100 ul 8號(hào)染色體開放閱讀框70抗體Rarres2/TIG2/FITC 熒光素標(biāo)記視黃酸受體應(yīng)答蛋白2抗體IgG100 ul 胰羧肽酶E抗體Rarres3/TIG3/Chemerin/FITC 熒光素標(biāo)記視黃酸受體應(yīng)答蛋白3抗體IgG20 ul 酸化細(xì)胞角蛋白18抗體rInsulin /HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗重組胰島素抗體IgG100 ug 20號(hào)染色體開放閱讀框112抗體rInsulin /FITC 熒光素標(biāo)記抗重組胰島素抗體IgG100 ul 10號(hào)染色體開放閱讀框88抗體rInsulin human monoclonal/FITC 熒光素標(biāo)記重組胰島素單克隆抗體IgG100 ul 富含半胱氨酸C端蛋白1抗體rInsulin monoclonal (pig)/FITC 熒光素標(biāo)記抗胰島素單克隆抗體(豬)IgG200 ul E1A激活基因刺激蛋白2抗體TIMP-1/FITC 熒光素標(biāo)記金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體IgG100 ul |