熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 疏螺旋體通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Borrelia spp. | 貨號 | YSP96457 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 1-甲基咪唑(>98%,BR)LIMD1 Antibody(R)-2-氧代四-基氨酸芐酯 1-乙基咪唑(>98%,BR)T7-Tag (D9E1X) XP® Rabbit mAb2-甲氧基-N- 1-萘乙(>98%,BR)T7-Tag (D9E1X) XP® Rabbit mAb2-溴吡啶-酸 乙酸-1-萘酯(>98%,BR)Phospho-CDC37 (Ser13) (D8P8F) Rabbit mAb2,3,5-三氯-吡啶甲 二十八烷(>98%,BR)GPNMB (E1Y7J) Rabbit mAb3,二氟酸 1-基-5-巰基四氮唑(>98.5%,BR)SignalSilence® MUC1 siRNA I2--5-氯吡啶 新戊二(>98%,BR)Claudin-1 (D5H1D) XP® Rabbit mAb阿德福韋 2,2-二甲基琥珀酸(>99%,BR)Claudin-1 (D5H1D) XP® Rabbit mAb2--氟 2,4,5-*氧基甲(>99%,BR)CtBP2 Antibody2--三氟甲酸 三溴酚(>98%,BR)Estrogen Receptor α (D6R2W) Rabbit mAb芐基縮水甘油 2,4,6-三(二甲氨基)酚(>95%,BC)SignalSilence® GRB2 siRNA IO-(2,4,6-三磺?;?乙酰羥肟酸乙酯 2,二甲基(>98%,BR)PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)氯-1,3,4,5-四氫-2H-1-并氮雜卓-2-酮 2,二甲(BR)PSMB6 (E1K9O) Rabbit mAb氯-甲基吡啶 2,7-二羥基萘(>98%,BR)ATPIF1 (D6P1Q) XP® Rabbit mAb氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶 2, 6-二氯醌-氯亞(>98%,BR)BAP1 (D7W7O) Rabbit mAb辛硫 2-金剛烷(>99%,BR)Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb2-氟-6-氨基嘌呤 2-金剛烷酮(>99%,BR)PathScan® Total Ezh2 Sandwich ELISA Kit3,5-二氯肼鹽酸鹽 2-氨基-氯甲酸(>98%,BR)Phospho-Merlin (Ser518) (D5A4I) Rabbit mAb2,二氯-6,7-二氫噻吩[3,2-D]嘧啶 疏螺旋體通用探針法熒光PCR檢測試劑盒漢坦病毒(HV)抗體(IgM)ELISA試劑盒CXCR3/CD183 細胞表面趨化因子受體3抗體400 ul 含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA試劑盒CXCR3/CD183 細胞表面趨化因子受體3抗體100 ul 含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA試劑盒CXCR5/CD185 細胞表面趨化因子受體5抗體300 ul 含SET域4(setd4)ELISA試劑盒Gastrin 胃泌素抗體10 mg 含patatin樣脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA試劑盒Gastrin 胃泌素/蛙皮素抗體100 ul 過氧化脂質(LPO)ELISA試劑盒Gastrin receptor 促胃泌素受體抗體20 ul 過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒GATA-3 GATA結合蛋白3抗體100 ul 過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒GATA-4 GATA結合蛋白4抗體400 ul 過氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒GATA-5 GATA結合蛋白5抗體100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |