熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 彎曲桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Campylobacter spp. | 貨號 | YSP96499 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 二十四烷酸甲酯(標準品)β-Amyloid (1-42 Specific) (D9A3A) Rabbit mAb氟溴乙基 芥酸甲酯(標準品)β-Amyloid (pE3 Peptide) (D5N5H) Rabbit mAb5-氯-2-氟 十九酸(標準品)β-Amyloid (pE3 Peptide) (D5N5H) Rabbit mAb5-氯靛紅酸酐 油酸(標準品)CDCA2 (D7T4P) Rabbit mAb溴-羥基 反式-9-十八酸甲酯(標準品)CENP-E Antibody氯-甲酸 對位紅(標準品)Phospho-Rad18 (Ser403) (D2T6W) Rabbit mAb4'-氟-3'-乙酮 巖芹酸(標準品)IRGM Antibody (Rodent Specific)α-異基對乙酸 D-泛(標準品)eRF3 AntibodyFmoc-L-基甘氨酸 糖精鈉標準溶液(1.00mg/mL,基體:純水)TPP2 Antibody1,6-二氯己烷 桃(標準品)Akt3 (E1Z3W) Rabbit mAb2-溴-(三氟甲基) 甲基壬酮(標準品)PTMScan® Phospho-Ser-Pro-Pro Motif [pSPP] Kit2-硝基-9,9-二甲基芴 2′-脫氧胞苷 鹽酸鹽PTMScan® Phospho-MAPK Substra Motif [PXpTP] Kit奧氮平 2,2,3,3,五氟-1-OX40L (D6X2D) Rabbit mAb1-叔丁氧羰基-氨基哌啶鹽酸鹽 1,1,2-三氯三氟乙烷(CFC-113)MLKL (D2I6N) Rabbit mAb二甲酰肼 (標準品)Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb2-氨基-氯二 標準溶液(標準品)Stat1 (D1K9Y) Rabbit mAb5-溴吡啶-(N-乙基)甲酰 酸氫二銨Stat1 (D4Y6Z) Rabbit mAb雙三氟磺酰亞銀鹽 Amberli?IRA402 強型陰離子交換樹脂(氯型)MCU (D2Z3B) Rabbit mAbD-2-羥基酸 彎曲桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)ELISA試劑盒IL-17 白介素-17抗體()100 ul 布盧姆綜合征蛋白(BLM)ELISA試劑盒IL-17R/IL-17RA/CD217 白介素17受體抗體20 ul 不對稱二甲基精氨酸(ADMA)ELISA試劑盒IL-17RC/IL-17RL 白介素17受體C抗體100 ul 補體因子I(CFI)ELISA試劑盒IL-17RD 白介素17受體D抗體100 ul 補體因子H相關(guān)蛋白1(CFHR1)ELISA試劑盒IL-17B 白介素-17B抗體1 Kit 補體因子H(CFH)ELISA試劑盒IL-17RB 白介素-17B受體抗體100 ul 補體因子B前體(pre-CFB)ELISA試劑盒IL-17C 白介素-17C抗體100 ul 補體片斷5b(C5b)ELISA試劑盒IL-17D/IL-27 白介素-17D抗體100 ul 補體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒IL-17E/IL-25 白介素-17E抗體100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |