熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 肺炎支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mycoplasma pneumoniae | 貨號 | YSP96986 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 Apelin 英文名稱: 脂肪炎癥因子Apelin抗體 0.1ml Anti-Tenascin C/Tn-C 細胞粘合素(固生蛋白)抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml (EGFR)ELISA Kit 大鼠表皮生長因子受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-SUMO 1 類泛素蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml BRCA-2(Human breast cancer susceptibility protein 2) ELISA Kit 人癌易感蛋白2 96T NDUFS7 英文名稱: 線粒體復合物NDUFS7蛋白抗體 0.2ml C14ORF140 英文名稱: 14號染色體開放閱讀框140抗體 0.2ml Anti-IL-33/NFHEV 白介素33抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml EGF(Human Epidermal growth factor) ELISA Kit 人表皮生長因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-CSF3 粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/PE PE標記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml ANG-1(Human Angiopoietin 1) ELISA Kit 人血管生成素1 96T phospho-c-Raf(Ser338) 英文名稱: 酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml α乳清蛋白 單克隆抗體alpha Lactalbumin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul EF手性域家族成員D1 單克隆抗體EFHD1 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul X射線修復交叉互補蛋白4 單克隆抗體XRCC4 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Di Methyl Lys79) 單克隆抗體(Q7)Histone H3 (Di Methyl Lys79) Monoclonal Antibody(Q7)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 子受體(LIFR)ELISA試劑盒英文名稱:Rat leukemia inhibitory factor receptor,LIFR ELISA Kit * 大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Cystatin C,Cys-C ELISA Kit* 大鼠胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Cytosolic Phospholipase A2,cPLA2 ELISA Kit* 人基因組DNA,女性Human Genomic DNA4℃保存100μg 人基因組DNA,男性Human Genomic DNA4℃保存100μg 人核糖核酸酶P基因PCR測定試劑盒低溫運輸,-20℃保存50T 人肥胖易感基因825T PCR測定試劑盒低溫運輸,-20℃保存50T 人單核細胞分離液1.075Cell Separation Solution-20℃保存200 mL 人雌激素受體基因PCR檢測試劑盒低溫運輸,-20℃保存50T 人博卡病毒PCR檢測試劑盒低溫?組蛋白H3 (Tri Methyl Lys36) 單克隆抗體(Q12)Histone H3 (Tri Methyl Lys36) Monoclonal Antibody(Q12)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul Oct1 單克隆抗體Oct1 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 肺炎支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒蛋白酸激酶PKC/CPI-17抗體CD72/Ly-32/FITC 熒光素標記CD72抗體IgG100 ul 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體CD74(MHC II )/FITC 熒光素標記CD74抗體IgG100 ul 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體TGF- Alpha /FITC 熒光素標記轉移生長因子–α抗體IgG100 ul 胰輔脂酶抗體TGF- Beta1/FITC 熒光素標記TGF-β1抗體IgG(標記抗體)100 ul 19號染色體開放閱讀框45抗體TGF- Beta2 /FITC 熒光素標記轉移生長因子–β2抗體IgG100 ul 過氧化氫誘導轉錄蛋白1抗體TGF- Beta3/FITC 熒光素標記轉移生長因子–β3抗體IgG100 ul 核因子NFκB激活蛋白1抗體TGF- BetaR1/ALK /FITC 熒光素標記轉移生長因子–β受體1抗體IgG100 ul 第12號染色體開放閱讀框23抗體TGF- BetaR 2/FITC 熒光素標記轉移生長因子–β受體2抗體IgG100 ul γ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體TGF- BetaR 3/FITC 熒光素標記轉移生長因子–β受體3抗體IgG100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |