產(chǎn)品名稱：土生克雷伯氏菌
貨號：YS-01J12970
拉丁文: Klebsiella terrigena

分離基物: 活性污泥

提供形式: 凍干物

安全等級: 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 環(huán)境污水處理

培養(yǎng)基: NB

生長條件: 37℃,好氧，24h，陰性桿菌，純

存儲條件: 真空冷凍干燥法

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

phospho-RAD9(Ser375)  磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體神經(jīng)特異蛋白酪氨酸磷酸酶N5抗體

phospho-RAD9(Ser336)  磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體足表達蛋白/轉(zhuǎn)錄因子21抗體

phospho-RAD9(Ser328)  磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體孕激素受體抗體

phospho-RAD9(Ser277)  磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體神經(jīng)突觸蛋白PCLO抗體

phospho-RAD9(Ser272)  磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體早老素γ分泌酶2抗體

phospho-RAD51(Tyr315)  磷酸化Rad51抗體泛酸激酶1抗體

phospho-RAD51(Thr310)  磷酸化Rad51抗體泛酸激酶2抗體

Phospho-Rad17 (Ser645)  磷酸化周期檢控Rad17蛋白抗體泛酸激酶3抗體

phospho-RACGAP1(Ser387)  磷酸化Rho GTP酶激活蛋白GAP抗體p53調(diào)控PA26核蛋白抗體

phospho-RAC1(Ser71)  磷酸化遷移誘導因子5抗體26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞型S5a抗體

phospho-Rab24(Tyr17)  磷酸化ras基因相關(guān)蛋白Rab24抗體絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶3B抗體

phospho-Rab24(Ser95)  磷酸化ras基因相關(guān)蛋白Rab24抗體蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移酶1α抗體

phospho-Pyk2/PTK2B(Tyr402)  磷酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體泛素連接酶抗體

phospho-Pyk2 (Tyr881)  磷酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體PGBD3蛋白抗體

phospho-PTPRA(Tyr798)  磷酸化酪氨酸磷酸酶α抗體泛酸激酶4抗體
土生克雷伯氏菌菌種傳代長枝木霉FBXW8蛋白抗體 INSULIN 質(zhì)量規(guī)格：BR，27U/mg,進分

紅酵母屬人纖維蛋白原單克隆抗體 INSULIN 質(zhì)量規(guī)格：BR，27U/mg,進分

熱帶假絲酵母FANCD2抗體 L-Aspartate Potassium 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

壁芽孢桿菌磷酸化FANCD2抗體 Coenzyme Q10,Ubiquinone 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

犬種布魯氏菌外基質(zhì)蛋白FREM2抗體 Coenzyme Q10 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

油菜菌核病菌面肩肱型肌營養(yǎng)不良癥相關(guān)蛋白FRG1抗體 vitamin A acetate 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標準品

豌豆根瘤菌CD350抗體 Humic acid 質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR

花楸近藤氏酵母CD344抗體 Usaramine 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。