特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 海鷗彎曲桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Campylobacter laridis | 貨號 | YSP96497 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 酸(HPAA)(標準品)SimpleChIP® Human HoxA9 Promor Primers溴-氯三氟甲 乙酮(標準品)BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb (ChIP Formulad)1-(2-羥乙基)-甲基氯化咪唑 甲(標準品)SimpleChIP® Human CTGF Promor Primers3,5-二氟- 氯(標準品)SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primers氟-(三氟甲基) 乙酰(標準品)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-萘甲 鄰甲氧基(標準品)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)溴-2-硝基芐 鄰氨基酚(標準品)Acetyl-Histone H3 (Lys23) (D6Y7M) Rabbit mAbN,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟酸鹽 2-氨基-硝(標準品)Phospho-Rpb1 CTD (Thr4) Antibody二乙溴氫酸鹽 乙(標準品)AGPAT2 (D8W9B) Rabbit mAb2-(氯-甲酰)甲酸 乙(色譜級)Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-氯-1-甲基咪唑 乙(農殘級)Malonyl-Lysine [Mal-K] MultiMab™ Rabbit mAb mix6-喹啉甲酸乙酯 乙(99.5%(GC))MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb谷維素 乙(AR,99.0%)Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (PE Conjuga)(三氟甲基)-1H-咪唑 乙(光譜級)TBC1D7 (D8K1Y) Rabbit mAb乙?;阴籽趸?/span> 乙(for DNA synthesis,≥99.9%(GC))MED26 (D4B1X) Rabbit mAb1H-吡咯并[2,B]吡啶-羧酸甲酯 乙酰(標準品)Phospho-NuMA (Thr2055) Antibody2,5-二氟酚 偶氮(標準品)FoxO1 (D7C1H) Mouse mAbN-甲基-D-天冬氨酸 酸洗石棉FoxO1 (D7C1H) Mouse mAb硝基二甲酮 海鷗彎曲桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒成纖維細胞生長因子4(FGF4)ELISA試劑盒IL-9 白介素9抗體100 ul 成纖維細胞生長因子23(FGF-23)ELISA試劑盒IL-10 白細胞介素-10抗體100 ul 成纖維細胞生長因子21(FGF21/UNQ3115/PRO10196)ELISA試劑盒IL-11 白介素11抗體100 ul 成纖維細胞生長因子13(FGF-13)ELISA試劑盒IL-10RA 白細胞介素-10受體a抗體100 ul 成纖維細胞生長因子10(FGF10)ELISA試劑盒IL-10RB 白細胞介素-10受體β抗體1 Kit 巢蛋白1(NID1)ELISA試劑盒IL-12 (rat, mouse) 白介素12抗體 (,)100 ul 超敏熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒IL-12 (human) 白介素12抗體()100 ul 超敏熱休克蛋白60(HSP-60)ELISA試劑盒IL-12RB1/CD212 白細胞介素-12受體β1抗體100 ul 超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)ELISA試劑盒IL12RB2 白細胞介素-12受體β2抗體100 ul |