熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點：
成本高；
設(shè)計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
吉馬酮（標準品）Phospho-SHP-2 (Tyr580) (D66F10) Rabbit mAb2-羥基-6-萘甲酸

加蘭他敏（標準品）Phospho-SHP-2 (Tyr580) (D66F10) Rabbit mAb2-硝基-甲砜

甲基蓮心（標準品）IP6K3 (D9O7J) Rabbit mAb硫氫化鈉

5-O-甲基維斯阿米苷（標準品）RACK1 (D59D5) Rabbit mAb異基肼鹽酸鹽

N-甲基野靛（標準品）Galectin-9 (D9R4A) XP® Rabbit mAb5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯

9-甲氧基喜樹（標準品）Galectin-9 (D9R4A) XP® Rabbit mAb乙氧基乙酮

10-姜酚（標準品）FastScan™ Phospho-Akt1 (Ser473) ELISA Kit氯酸

6-姜酚（標準品）RF2IP (D9H4) Rabbit mAb乙基三基化膦

8-姜酚（標準品）Jagged1 (D4Y1R) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)環(huán)戊基異酸酯

姜酮(標準品)EGF Receptor (D1D4J) XP® Rabbit mAb (Neutralizing)(S)-羥基哌啶鹽酸鹽

姜酮(標準品)EGF Receptor (D1D4J) XP® Rabbit mAb (Neutralizing)(S)-1-N-叔丁氧羰基-2-(氨基乙基)哌啶

6-姜酚（標準品）FoxM1 (D12D5) XP® Rabbit mAb2-氯乙酰乙酸甲酯

絞股藍皂苷XLIX(標準品)FoxM1 (D12D5) XP® Rabbit mAbN-甲基-1,2-二

YM-201636MMP-1 (E9S9N) Rabbit mAb2,2-二羥甲基酸

金石蠶苷（標準品）ERCC1 (D61F5) Rabbit mAb1-萘甲

金絲桃苷(標準品)Phospho-Histone H2A.X (Ser139/Tyr142) Antibody2-

京尼平(標準品)SKAR α/β (D65E8) XP® Rabbit mAb五甘

阿非迪霉素；艾菲地可寧LRP5 (D5G4) Rabbit mAb1,8-二氨基萘
雪腐鐮刀菌探針法熒光PCR檢測試劑盒胞質(zhì)乙脫氫酶1抗體CD117/FITC  熒光素標記CD117抗體IgG100 ul

ADP核糖基化樣因子ARL3抗體CD133 gen/FITC  熒光素標記造血干細胞抗原CD133抗體IgG100 ug

花生四酸15脂氧合酶1抗體OX40/CD134/TNFRSF4/FITC  熒光素標記CD134抗體IgG100 ul

癌增強蛋白2抗體IL-7Ra/CD127/PE   熒光素PE標記兔抗、大、、馬、兔白細胞介素-7受體a抗體IgG100 ul

α1微球蛋白抗體CD137/TNFRSF9/FITC  熒光素標記CD137抗體IgG100 ul

α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體CD133 antigen/PE  熒光素藻紅蛋白標記兔抗、大、和果蠅CD133抗體IgG100 ul

腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體HVEM/TNFRSF14/FITC  熒光素標記腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體IgG100 ul

AMPK的相關(guān)蛋白激酶5抗體Syndecan-1/CD138/FITC  熒光素標記多配體聚糖抗體IgG100 ul

致瘤蛋白32相關(guān)蛋白1抗體CD141/FITC  熒光素標記凝血調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG100 ul
PCR技術(shù)的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。