特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 斯氏普羅威登斯菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Providencia stuarti | 貨號(hào) | YSP97114 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 白介素28A(IL28A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 稻綠核菌 1g 生長分化因子2(GDF2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 葡萄座腔菌 5g 白介素17B(IL17B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 突孢毛殼 100g 成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 產(chǎn)黃青霉 25g 表皮調(diào)節(jié)素(EREG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 大腸埃希菌 5g 表皮調(diào)節(jié)素(EREG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 季也蒙假絲酵母 1g 趨化因子C-C-基元受體1(CCR1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 巴西果小克銀漢霉 25g 肝X受體α(LXRα)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% Pseudomonas tremae 5g 翻譯調(diào)節(jié)腫瘤蛋白1(TPT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 吉氏根瘤菌 100g 成纖維細(xì)胞生長因子9(FGF9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 洋蔥伯克霍爾德氏菌 25g 纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 出芽短梗霉 5g 整合素β6(ITGβ6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 異??藵h姆酵母 25g 核糖核酸酶A(RNASE1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 大腸埃希氏菌 5g 脂肪酸合酶(FASN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 黑曲霉 1g 汗酸酶αL(IDUα)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% Cystofilobasidium 250mg 促凋亡蛋白1(APOPT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 黑曲霉 5g 巖藻糖變旋酶(FucM)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99%,升華純化 球孢白僵菌 100mg Nesprin 4蛋白(Nesp4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 黑曲霉 250mg 斯氏普羅威登斯菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒雙氧化酶成熟因子抗體Cdc34 peptide 細(xì)胞周期調(diào)控因子34抗原1 Kit 胞質(zhì)分裂專一蛋白7抗體CDK1 (Cyclin-Dependent Kinase 1) 周期素依賴性激酶1抗原100 ul DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄樣蛋白4抗體CDK5(Cyclin Dependent Kinase 5) 周期素依賴性激酶5抗原1 Kit 死亡相關(guān)蛋白3抗體CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) 周期素依賴性激酶6抗原1 Kit 防御素α6抗體CDK7/Cyclin H/MAT1 周期素依賴性激酶7抗原1 Kit S期激酶活化蛋白DBF4B抗體CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依賴性激酶8抗原100 ul 脫氧胞苷激酶抗體Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C) 周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗原1 Kit 短鏈脫氫還原酶3抗體CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like proin 1 ) 軟骨糖蛋白39(多肽)100 ul DNA聚合酶θ/DNA pol θ抗體CEA(Carcinoembryonic Antigen )peptide 癌胚抗原抗原1 Kit |