PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 產(chǎn)品名稱 | 印度血吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Schistosoma indicum | 貨號 | YSP97181 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! SHC-轉(zhuǎn)化蛋白1(SHC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 類布氏乳桿菌 25g 肌動蛋白束蛋白2(FSCN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 礦泉水 鈣、鎂、鉀、鈉、鍶、硒、偏硅酸 25g 羥甲基膽素合酶(HMBS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 栗疫菌 5g 腎小球蛋白(GLMN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 巴氏醋桿菌 1g 尿嘧啶核苷酸化酶2(UPP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 釀酒酵母 25g 堿性神經(jīng)酰胺酶1(ACER1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 假交替單孢菌 5g 堿性神經(jīng)酰胺酶2(ACER2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 日本慢生根瘤菌 1g N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶2(ASAH2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) EP 運(yùn)動節(jié)桿菌 120mg 鞘氨醇激酶1(SPHK1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) >98.0%(GC) 鄉(xiāng)間布丘氏菌 1g 鞘氨醇激酶2(SPHK2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 葉點(diǎn)霉屬 250mg 軸突生長誘向因子G1(NtnG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 鹽古桿菌 1g 軸突生長誘向因子3(Ntn3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 布魯氏菌 生物Ⅱ型 5g 軸突生長誘向因子G2(NtnG2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥95.0%(異構(gòu)體混合物,HPLC) 中性彎曲嗜酸菌 1g 微管蛋白β1(TUBβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥95.0%(異構(gòu)體混合物,HPLC) 產(chǎn)朊假絲酵母 5g 微管蛋白β3(TUBβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 黑木耳 100g 微管蛋白β6(TUBβ6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 中慢生華癸根瘤菌 25g 微管蛋白β4(TUBβ4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 殺鮭氣單胞菌 25g 微管蛋白α8(TUBα8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 黃色短桿菌 5g 印度血吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒內(nèi)皮分化型G蛋白偶聯(lián)受體3抗體Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 proin) Tsg101抗原1 Kit 發(fā)育相關(guān)蛋白ERCC6L抗體(致畸因子)TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor) 促甲狀腺素受體抗原1 Kit 豬源產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌K99抗體MAP1LC3A(microtubule-associad proin 1 light chain 3) 自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗原1 Kit α內(nèi)磺肽抗體TSLC1 (tumor suppressor in lung cancer-1) 肺癌腫瘤阻抑基因1抗原1 Kit 酸化轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體TTF-1 (Thyroid Transcription Factor-1) 甲狀腺核轉(zhuǎn)錄因子-1抗原1 Kit 表皮生長因子樣激素受體1抗體Tubulin- Gamma 微管蛋白-γ抗原1 Kit CREB結(jié)合蛋白p300抗體TWIST proin peptide TWIST蛋白抗原1 Kit EB病毒LMP-2A蛋白抗體T Beta10 peptide 胸腺素β10抗原100 ul EB病毒核抗原1抗體UCN(Urocortin)mouse ret 新型血管活性因子UCN抗原(、)1 Kit |