PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 蜜蜂微孢子蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Nosema spp. | 貨號 | YSP97017 |
熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 跨膜絲氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 水生屈曲桿菌 5g
畸胎瘤衍生生長因子1(TDGF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 大孢子鏈霉菌 25g Ⅹ型膠原(COL10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% Winogradskyella damuponensis 5g 拓撲異構(gòu)酶Ⅰ()檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 茶云紋葉枯病 10g 葉酸受體1(FOLR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 輪枝菌(大豆胞囊線蟲卵寄生真菌) 2.5g 聚集蛋白聚糖(AGC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 粘蓋牛肝菌* 1g B-細胞激活因子(BAFF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 巴斯德畢赤酵母 25g 細胞間粘附分子4(ICAM4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 5g 阻抑素(PHB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 青霉 1g 層粘連蛋白(LN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 土曲霉 5g Ⅲ型前膠原(PCⅢ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 60 wt. % in H2O 腸膜明串珠菌 100ml 平足蛋白(PDPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 60 wt. % in H2O 芽孢桿菌屬 500ml 前梯度蛋白2(AGR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 蒙氏假單胞菌 100g 整合素αM(ITGαM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 玉龍小單孢菌 25g 存活素(Surv)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 大豆慢生根瘤菌 500g Ⅸ型膠原α1(COL9α1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽胞桿菌 1g Ⅹ型膠原(COL10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 綠粘帚霉 250mg Persephin蛋白(PSPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 哈茨木霉 50mg 蜜蜂微孢子蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒豬瘟病毒抗體ZNF474/FITC 熒光素標記鋅指蛋白474抗體IgG20 ul 豬瘟病毒抗體ZO-1/FITC 熒光素標記胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體IgG100 ul 嗜鉻粒蛋白C抗體ZW10 peptide/FITC 熒光素標記著絲粒蛋白抗體IgG100 ul 煙型酰膽受體α10/AChRα10抗體Zyxin/FITC 熒光素標記斑聯(lián)蛋白抗體IgG100 ul 煙型酰膽受體α6/AChRα6抗體Phospho-Zyxin (Ser142/Ser143)/FITC 熒光素標記酸化斑聯(lián)蛋白抗體IgG100 ul 煙型酰膽受體α9/AChRα9抗體TORC1/CRTC1/FITC 熒光素標記環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體IgG20 ul 煙型酰膽受體δ/AChRδ抗體Torc2/Crtc2/FITC 熒光素標記CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體IgG100 ul 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體Phospho-Torc2/Crtc2 (Ser171)/FITC 熒光素標記酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體IgG100 ul 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體Gentamicin Monoclonal Antibody /Gold 膠體金離子標記抗慶大霉素單克隆抗體IgG100µg |