特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 毛樣枝孢霉探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Cladosporium trichoides | 貨號(hào) | YSP96553 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 四甲基硫酸氫銨(離子色譜級(jí),≥99.0%(T))PAK3 Antibody羥基磺酸鈉 三乙(LC-MS淋洗劑,≥99.5%(GC))PAK3 Antibody代叔丁烷 四乙基溴化銨(離子對(duì)色譜級(jí))PTMScan® Glutaryl-Lysine [Glut-K] Kit6,6'-二甲基-2,2'-聯(lián)吡啶 四丁基化銨(離子對(duì)色譜級(jí))PRAS40 Antibody乙二乙醋酸酯 三辛(離子對(duì)試劑)Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) Antibody5-甲基異噁唑-酰氨 甲酸鈉(for HPLC,≥99.0%(NT))PRK2 Antibody4,5-二氨基-6-巰基嘧啶 1-己烷磺酸鈉(離子對(duì)色譜級(jí),>98.0%(T))HP1β Antibody2-溴乙酰 高氯酸鈉,無水(for HPLC,99.0%)Pan-Calcineurin A Antibody氟磺?;柞?/span> 四甲基溴化銨(離子對(duì)色譜級(jí),≥99.0%(AT))PAK2 (C17A10) Rabbit mAb三氟 三溴(光譜級(jí),>99.0%(GC))PAK2 (C17A10) Rabbit mAb3,二氯 草酸鈉容量分析用溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(0.05M)HP1α Antibody對(duì)甲氧基甲酸乙酯 氫氧化鈉容量分析用標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.0997mol/L)eIF4G (C65H5) Rabbit mAb三羥甲基氨烷馬來酸酯 剛果紅(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97.0%(HPLC))HP1γ Antibody(2S,5S)-2,5-己二 正癸酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))Jagged1 (28H8) Rabbit mAb并[B]噻吩-乙酸 異丁酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC))Jagged1 (28H8) Rabbit mAb2-(1H-吡唑-1-基)乙酸 甲基反亞油酸甲酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品)CD161/KLRB1 (HP-3G10) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjuga)N-BOC-L-1,2,3,四氫異喹啉-羧酸 肉豆蔻酸甲酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))JMJD1B/JHDM2B Antibody2-氨基-5-溴甲酰 三聚(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(HPLC))GST Antibody5-溴-2-氟三氟甲 毛樣枝孢霉探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒8異(8-iso-PG)ELISA試劑盒NEDD4L/NEDD4-2 泛素連接酶NEDD4-2抗體100 ul 8-異構(gòu)F2α(8-epi-PGF2α)ELISA試劑盒Phospho-NEDD4L (Ser342) 酸化泛素連接酶NEDD4-2抗體100 ul 8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒NCoR2 核受體輔助抑制因子2抗體100 ul 8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)ELISA試劑盒NEP/MME 金屬肽鏈內(nèi)切酶抗體100 ul 6酮F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒NDRG1/Cap43 分化相關(guān)基因NDRG1抗體100 ul 6酮(6-K-PG)ELISA試劑盒Phospho-NDRG1 (Ser330) 酸化分化相關(guān)基因NDRG1抗體100 ul 6-羥多巴(6-OHDA)ELISA試劑盒Phospho-NDRG1 (Thr346) 酸化分化相關(guān)基因NDRG1抗體20 ul 60S核糖體蛋白L36a-樣(RPL36AL)ELISA試劑盒NDRG2 抑癌基因NDRG2抗體100 ul 60S核糖體蛋白L17(RPL17)ELISA試劑盒NDRG3 抑癌基因NDRG3抗體100 ul |