樣品RNA的抽提: ①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 枝孢霉通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cladosporium spp. | 貨號 | YSP96552 |
實驗過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 石油(for GC,用于環(huán)境分析)Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32)/FoxO4 (Thr28) (4G6) Rabbit mAb1-(甲氧基基)哌 季戊四(色譜固定液,150℃)Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32)/FoxO4 (Thr28) (4G6) Rabbit mAb雙乙酰酮基二丁基錫 正(農(nóng)殘級)Phospho-HP1γ (Ser83) Antibody阿卡波糖 異硫酸酯(99%,用于HPLC標(biāo)記)Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) Antibody溴五氟 正戊烷(農(nóng)殘級)Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) Antibody5-氯吡啶-2- 聚酰粉(柱層析用)PAK1 Antibody1-(2-氟基)哌 酸(色譜級, 85-90%)PAK1 Antibody戊 聚酰粉(柱層析用,200-400目)CD8α (RPA-T8) Mouse mAb (APC-Cy7® Conjuga)甲氧基-甲氧基羰基酸 聚酰粉(柱層析用,10-30目)AMPKα (23A3) Rabbit mAb4,5-二氯噠-3(2H)-酮 酸氫二鈉,二水(for HPLC, ≥99%(T))PAK1/2/3 Antibody2,6-二羥基乙酮 高氯酸鈉,一水(色譜級,≥99.0%(T))PAK1/2/3 Antibody間甲磺酰氯 無水硫酸鈉(農(nóng)殘級)Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) Antibody氯磺酰氯 無水硫酸鈉(for HPLC,≥99.0%(T))Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) Antibody氟試劑 碳酸氫鈉(for HPLC,≥99.0%)Phospho-PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141) Antibody奎諾二甲基酸酯 四丁基酸二氫銨(HPLC)Phospho-PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141) Antibody氘代氫化鋰鋁 四己基硫酸氫銨(用于離子色譜,≥99.0%(T))Phospho-PAK2 (Ser20) Antibody溴甲基-5-氯并噻吩 三乙鹽酸鹽(for HPLC,≥99.0%)Phospho-PAK2 (Ser20) Antibody聯(lián)二噻吩 四甲基硫酸氫銨(99%)PAK2 Antibody五氟甲 枝孢霉通用探針法熒光PCR檢測試劑盒alpha突觸核蛋白(淀粉樣前體非A4成分蛋白)低聚物(SNCA oligomer)ELISA試劑盒NAP1/NAP1L1 核小體組裝蛋白1抗體100 ul Alpha-D 酚/維生素E(Alpha-D TPL)ELISA試劑盒NB3/CNTN6 神經(jīng)細胞NB3特定蛋白抗體100 ul alpha-1腎上腺素能受體(ADRA1)IgG抗體ELISA試劑盒P95/NBS1 DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體100 ul AFG3樣蛋白2(AFG3L2)ELISA試劑盒Phospho-p95/NBS1 (Ser343) 酸化DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體100 ul Adropin(ENHO)ELISA試劑盒N-cadherin N-鈣粘附分子抗體100 ul ADP-核糖基化因子5(ARF5)ELISA試劑盒E-cadherin 上皮鈣粘附分子抗體100 ul ADP-核糖基化因子4(ARF4)ELISA試劑盒Nck1/Nck2 NCK銜接因子蛋白2抗體100 ul ADAM金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA試劑盒NCOA2/KAT13C 核受體輔助激活蛋白2抗體20 ul 8異F2α(8-iso-PGF2a)ELISA試劑盒NCoR1 核受體輔助抑制因子1抗體100 ul |