特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 糞產(chǎn)堿桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Alcaligenes faecalis | 貨號 | YSP96364 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 依達(dá)拉奉(標(biāo)準(zhǔn)品)C36H62O82-羥基-甲 氫化奎寧定;雙氫奎尼丁C36H60O7乙?;?2-氟吡啶 鹽酸依匹斯汀C20H18NO4氯-2-酚 鹽酸依匹斯汀(標(biāo)準(zhǔn)品)C13H18O7反式-2-甲基-2-戊烯酸 依普利酮C53H90O22氟吡啶鹽酸鹽 依普利酮(標(biāo)準(zhǔn)品)C48H82O19N-甲基咔唑 戊酸雌二C42H72O142-氨基-基-5-甲基噻吩 戊酸雌二C36H62O10對甲氧基肉桂酸辛酯 依替膦酸鈉C41H70O13三單甲 度酸C30H52O42-氯-氟三氟甲苯 度酸(標(biāo)準(zhǔn)品)C58H92O252-苯基烯酸 孕烯C34H46O18溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯 依維莫司C47H76O162,二苯基-甲基-1-戊烯 醋酸氟輕松;醋酸膚輕松C25H32N2O61-戊烯-酮 醋酸氟輕松;醋酸膚輕松(標(biāo)準(zhǔn)品)C59H96O25溴苯甲酰氯 馬來酸氟吡汀C48H72O17溴-2- 馬來酸氟吡汀(標(biāo)準(zhǔn)品)C16H10N2O2四乙基亞甲基二磷酸脂 氟維司群C20H22O93,二溴吡啶 糞產(chǎn)堿桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒Caldesmon 鈣介質(zhì)素抗體100 ul 抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒phosphor-Caldesmon(Ser789) 磷酸化鈣介質(zhì)素抗體10 mg 抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒Calpain 1 鈣蛋白酶1抗體100 ul 抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒Calpain 2 鈣激活的中性蛋白酶2抗體100 ul 抗小核糖核蛋白/Sm(snRNP/Sm)抗體ELISA試劑盒Calponin 1 鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體100 ul 抗線粒體ADP/ATP載體(AAC)抗體ELISA試劑盒Phospho-Troponin I (Ser23/24) 磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體100 ul 抗透明帶抗體IgG(aZP-IgG)ELISA試劑盒Calmodulin/CAM 鈣調(diào)節(jié)素抗體20 ul 抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(IgM)ELISA試劑盒CaMK2a 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體100 ul 抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(IgG)ELISA試劑盒phospho-CaMK2 alpha (Thr286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體100 ul |