實(shí)驗(yàn)外包: 1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學(xué)分析 2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq 3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM 4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR 5.蛋白質(zhì)檢測:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA 6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選 7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR 8.細(xì)胞及動物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動物模型構(gòu)建 服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 ? 產(chǎn)品名稱 | 芽孢桿菌通用PCR檢測試劑盒規(guī)格 ? | 英文名稱 | Bacillus spp.PCR | 貨號 | HE30676-R |
使用方法: 一、樣品 DNA 的制備 用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。 二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。 1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。 3. 產(chǎn)品僅用于科研先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。 4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。 5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。 6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。7. NC 管中不加任何陽性對照。 8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。 3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 特點(diǎn)優(yōu)勢: 1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。 2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。 3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。 4. 實(shí)用性:產(chǎn)品僅用于科研檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。 5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。 6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。 PC4,SFRS1互動蛋白1試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>97.5%,BC 包裝;5g P53抗體elisa試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;100g P2蛋白抗體試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:BR 包裝;25g P2蛋白抗體試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BS 包裝;25ml P27蛋白試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>30%,Ind Grade 包裝;5ml P0蛋白抗體試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級 包裝;1g P0蛋白抗體試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:BR,UV>30% 包裝;1g OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成酶抗體試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:BR 包裝;25g N-乙?;?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;5g N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級 包裝;100mg N-甲基-D-天冬氨酸受體試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:38000~42000 mpa.s 包裝;500mg N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 包裝;1g N端中段骨鈣素試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>99%,5N 包裝;5g N端前腦鈉素試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:Type I-S; from bovine submaxillary glands 包裝;250g NOD樣受體試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98%,EP 包裝;50g NET-1 elisa試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;1g NADPH氧化酶3試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>99.9%,BR 包裝;1g 芽孢桿菌通用PCR檢測試劑盒規(guī)格 Yersinia Pseudotuberculosis 中文名稱:假結(jié)核耶爾森氏菌種屬:Yersinia Pseudotuberculosis提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件:30℃,好氧 純度:98% Yersinia enterocolitica 中文名稱:小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌種屬:Yersinia enterocolitica提供形式:凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級:2模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:26-29℃,好氧存儲條件:2-8℃冷藏,凍干管10年以上,斜面1-3個(gè)月。 純度:≥97% Brevundimonas diminuta 中文名稱:缺陷短波單胞菌種屬:Brevundimonas diminuta提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件:37℃,好氧 純度:98% Pediococcus acidilactici Lindner 中文名稱:乳酸片球菌種屬:Pediococcus acidilactici Lindner提供形式:凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:乳酸菌培養(yǎng)基: Ⅱ:Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract () 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐溫) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸鈉) 5g Diamine citrate (檸檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸餾) 1000m pH 6.5-6.8。121℃,15min。傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:30℃,好氧存儲條件:2-8℃冷藏 純度:98% Clostridium tyrobutyricum 中文名稱:酪丁酸梭菌種屬:Clostridium tyrobutyricum提供形式:凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:產(chǎn)丁酸培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:生孢梭菌培養(yǎng)基:胰蛋白胨 10.0克 10.0克 葡萄糖 5.0克 氯化鈉 5.0克 酵母膏 3.0克 醋酸鈉 3.0克 可溶性淀粉 1.0克 半胱氨酸 0.5克 瓊脂 0.5克 pH6.8±0.2,蒸餾 1000ml 強(qiáng)化梭酸培養(yǎng)基:,F(xiàn)T傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:37℃,厭氧,存儲條件:2-8℃冷藏 純度:97% Bifidobacterium│longum 中文名稱:長雙歧桿菌種屬:Bifidobacterium│longum分離基物:健康嬰兒糞便提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:食品發(fā)酵,原料預(yù)處理加工,抗膽汁鹽,抗胃酸,抗氧化;用于益生菌類食品。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0787生長條件:37℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97% Staphylococcus albus Rosenbach 中文名稱:白色葡萄球菌種屬:Staphylococcus albus Rosenbach提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH 7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4•H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件:37℃,好氧 純度:98% Listeriawelshimeri 中文名稱:威爾氏李斯特菌種屬:Listeriawelshimeri安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:檢測用菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長條件:30℃ 純度:98% |