熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 豬滑液支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mycoplasma hyosynoviae | 貨號(hào) | YSP96979 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 EP3 英文名稱: 前列腺素E受體3抗體 0.1ml 肝癌高表達(dá)基因抗體 Anti-PEG10 1ml Anti-SSTR3/FITC 熒光素標(biāo)記生長抑素受體3(SSTR3)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Phospho-MYPT1/MBS(Ser507) 酸化肌球蛋白酸酶抗體 規(guī)格 0.1ml MMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg 人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA試劑盒英文名稱:human Hepatitis D virus IgG,HDV IgG ELISA Kit進(jìn)口/原裝 人丁型肝炎IgM(HDV IgM)ELISA試劑盒英文名稱:Human Hepatitis D virus IgM,HDV IgM ELISA Kit進(jìn)口/分裝 C12ORF54 英文名稱: 12號(hào)染色體開放閱讀框54抗體 0.2ml Anti-Insulin Receptor Alpha 胰島素受體α抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml PF(Human Pemphigus Foliaceus) ELISA Kit 人落葉型天皰瘡抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-Integrin beta 7 整合素β7抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml Rhesus antibody Rh LIPG/Endothelial lipase 內(nèi)皮脂肪酶抗體 規(guī)格 0.2ml HPV-IgG(Human papillomavirus IgG) ELISA Kit 人狀瘤病毒抗體IgG 96T REEP1 英文名稱: 受體輔助蛋白1抗體 0.2ml CK7 單克隆抗體CK7 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul CK8 單克隆抗體CK8 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul CK16 單克隆抗體CK16 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 尾部型同源框轉(zhuǎn)錄因子2 單克隆抗體CDX2 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 肌球蛋白重鏈 單克隆抗體Myosin Heavy Chain Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白 單克隆抗體GFAP Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 豬滑液支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒CHES1蛋白抗體Survivin/FITC 綠色熒光素標(biāo)記Survivin蛋白抗體IgG100 ul 哺動(dòng)物酸性幾丁質(zhì)酶抗體Survivin/PE 熒光素PE標(biāo)記細(xì)胞凋亡抑制因子抗體IgG100 ul 幾丁質(zhì)酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體SUR1/FITC 熒光素標(biāo)記磺酰脲類藥物受體1抗體IgG20 ul 嵌合蛋白2/β2-chimaerin抗體SYK/FITC 熒光素標(biāo)記非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體IgG100 ul 幾丁質(zhì)酶1抗體Phospho-Syk (Tyr323) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體IgG100 ul 白細(xì)胞抗原CD97 alpha 抗體Phospho-Syk (Tyr525/526) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體IgG100 ul 緊密連接蛋白2抗體SYT3/FITC 熒光素標(biāo)記突觸結(jié)合蛋白3抗體IgG100 ul 緊密連接蛋白7抗體SAP-1/FITC 熒光素標(biāo)記抗突觸素抗體IgG100 ul 2號(hào)染色體開放閱讀框53抗體Synapsin I /FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)突觸素1抗體IgG100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 |