特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 豬圓環(huán)病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Porcine Circovirus(PCV) | 貨號 | YSP97091 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 肉毒堿棕櫚?;D(zhuǎn)移酶1A(CPT1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 花楸盤多毛孢 5g P物質(zhì)(SP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% Pseudomonas koreensis Kwon et al. 1g 皮質(zhì)醇(Cortisol)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蠟樣芽孢桿菌 500mg 尿調(diào)蛋白(UMOD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 巴斯德駒形氏酵母 5g 異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 巴西果小克銀漢霉 1g N-酰神經(jīng)氨酰酸合酶(NANS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 根瘤菌 25g 4-羥基丙酮酸雙加氧酶(HPD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 綠毛殼擬毛梭孢變種 5g 甲腺原氨酸脫酶Ⅲ(DIO3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >97.0%(GC) 枯草芽孢桿菌 1g 氫離子轉(zhuǎn)運ATP酶溶酶體輔助蛋白2(ATP6AP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >97.0%(GC) 費爾氏酵母 5g 芳香烴受體核轉(zhuǎn)位因子(ARNT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 1g 白細胞衍生趨化因子2(LECT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大毛霉 100g 腫瘤壞死因子α誘導蛋白2(TNFαIP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 稻田彎曲嗜酸菌 25g 環(huán)腺苷二酸核糖水解酶(cADPRH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 朱黃籃狀菌 500g Klothoβ蛋白(KLβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 膠孢 100g 脯氨酰4-羥化酶α多肽Ⅱ(P4Hα2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 小孢根霉須狀變種 25g N-myc下游調(diào)節(jié)基因2(NDRG2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 假單胞菌屬 5g 骨橋素(OPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥97% 新城疫病毒 25MG 70kDa熱休克蛋白8(HSPA8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 核盤菌 1g 豬圓環(huán)病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒鈣激活的中性蛋白酶2抗體N-coR1 (Nuclear receptor co-repressor 1) 核受體輔助抑制因子(抗原)400 ul CD45RO抗體Nestin 巢蛋白(神經(jīng)上皮干細胞蛋白)(抗原)100 ul 嗜中性粒細胞抗原CD177抗體AR Alpha1( Alpha1-adrenergic receptor) α1腎上腺素能受體抗原20 ul 鈣整合素結合蛋白1抗體Nestin 巢蛋白(神經(jīng)上皮干細胞蛋白)(抗原)100 ul 21號染色體開放閱讀框7抗體ASCL1/MASH1(Achae-scu homolog 1) 神經(jīng)母細胞特異性轉(zhuǎn)移因子抗原100 ul 酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體ASPP1(apoptosis stimulating proin of P53 1) p53凋亡刺激蛋白1抗原100 ul 酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體ASPP2(apoptosis stimulating proin of P53 2) P53凋亡刺激蛋白2抗原100 ul 酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體neurofasciu-155 神經(jīng)束蛋白-15520 ul 酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體NGF- Beta 神經(jīng)生長因子-β(多肽片斷抗原)100 ul |