樣品RNA的抽提: ①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 牛皰疹病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bovine Hepervirus (BoHV) | 貨號 | YSP96461 |
實驗過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 基-2-乙酰氨基-2-脫氧-b-D-葡萄糖苷(>99%,BC)Phospho-4E-BP1 (Thr70) (D7F6I) Rabbit mAb十二烷基 -Α-L-吡喃海藻糖苷(>98%,BC)Phospho-p90RSK (Ser380) (D5D8) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-3,3,三氟 基-beta-D-葡萄糖酸苷(>98%,BC)KHSRP (E2E2U) Rabbit mAb1-溴-氟-5- 肼(>98%,BC)Nogo-A Antibody2,8-二氯喹啉-甲 酮(>98%,BR)CD9 (D3H4P) Rabbit mAb紫蘇 無毒型核酸染色劑Phospho-Rad17 (Ser635) (D6K9P) Rabbit mAb1H-吲唑-6-羧酸 5,5-二甲基-1,環(huán)己二酮Enolase-1 (D2S1A) Rabbit mAbN,N'-二(2-氨乙基)-1,二 5-氟胞苷(>98%,BR)GATA-3 (D13C9) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)2-氨甲基-(氟芐基)嗎啉 駢三氮唑(>98%,BR)SimpleChIP® Human NR1D1 Promor Primers5-二并環(huán)庚酮 5-甲基吲哚(>98%,BR)Munc18-1 (D4O6V) Rabbit mAb1-氯-2-三氟甲氧基 5-硝基愈創(chuàng)木酚(植物激素級)CNOT6 (E1L8F) Rabbit mAb二(乙酰酮基)鈦酸二異酯 6-溴-2-萘酚(>98%,BR)PTMScan® Acetyl-Lysine Motif [Ac-K] Kit9,9-二甲基氧雜蒽 6-(γ,γ-二甲基基氨基)嘌呤核苷(植物激素級)Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb(S)-N-芐氧羰基-氨基-基-1- 6-甲基(>98%,BR)E-Tag Antibody2-甲基吡咯烷 7-氨基頭孢烷酸SSRP1 (E1Y8D) Rabbit mAb1-BOC-羥甲基哌 8-羥基喹哪啶(>98%,BR)Choline Kinase α (D5X9W) Rabbit mAb氨基甲酸甲酯 9,10-二溴蒽(>98%,BR)PHGDH Antibody甲酰基吲哚酸-1-羧酸 T-丁基酯 雙酚芴(>98%,BR)Focal Adhesion Proin Antibody Sampler Kit3,5-吡唑二甲酸 牛皰疹病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒骨橋素(OPN)ELISA試劑盒GFR Alpha-1 GDNF家族受體α-1抗體100 ul 骨膜蛋白/成骨細(xì)胞特異性因子2(POSTN)ELISA試劑盒GHR 生長激素受體抗體100 ul 骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒Ghrelin 腦腸肽抗體20 ul 骨性酸酶(BALP)ELISA試劑盒GHRF/GHRH 生長激素釋放激素抗體100 ul 骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒ID1 DNA結(jié)合抑制因子1抗體100 ul 骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒GIG8/ID2 DNA結(jié)合抑制因子2抗體500 ul 骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒GIP 胃泌素抑制肽抗體100 ul 骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒TNFRSF18 糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體抗體100 ul 骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒Glasses Snake poison Proin 兔抗眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體(眼鏡蛇)100 ul |