熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 產(chǎn)品名稱 | 犬諾瓦克病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Canine Norovirus | 貨號 | YSP96514 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
合成硅酸鎂吸附劑(250-125um)GFP (D5.1) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)富勒 戊菊酯(標(biāo)準(zhǔn)品)PP2A C Subunit Antibody2,降莰烷二羧酸 呋喃他酮(標(biāo)準(zhǔn)品)PP2A C Subunit Antibody(溴基吡唑 吡氟禾草靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.101mg/ml)PP2A A Subunit AntibodyETHYL 2-(2-BROMOPHENYL)ACETAMIDE 惡唑酮菌(標(biāo)準(zhǔn)品)Myc-Tag (9B11) Mouse mAb (HRP Conjuga)巰基羥基肉桂酸 氟蟲脲(標(biāo)準(zhǔn)品)PP2A A Subunit (81G5) Rabbit mAb新四唑,二甲 氟磺草(標(biāo)準(zhǔn)品)PP2A A Subunit (81G5) Rabbit mAb1,1-雙(環(huán)己基-羥基)環(huán)己烷 氟酰(標(biāo)準(zhǔn)品)XIAP Antibody哌啶磺酰 氟硅唑(標(biāo)準(zhǔn)品)XIAP Antibody氟-2-氧基基酸 銳勁特(標(biāo)準(zhǔn)品)XIAP Antibody5-BROMO-2-METHYLTHIOANISOLE 丁威(標(biāo)準(zhǔn)品)PTMScan® Phospho-Enrichment IMAC Fe-NTA Magnetic BeadsN-甲基二基 唑螨酯(標(biāo)準(zhǔn)品)PTMScan® Phospho-Enrichment IMAC Fe-NTA Magnetic Beads1-甲基-1-環(huán)已羧酸 精乙基噁唑禾草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Jurkat Apoptosis Cell Extracts (etoposide)溴-1-甲基-1H-咪唑 Amberli® IRC-748螯合型離子交換樹脂DYKDDDDK Tag Antibody (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) (HRP Conjuga)酸(三-N-十四(烷)基)酯 Amberlyst15離子交換樹脂(濕)HDAC5 (D1J7V) Rabbit mAb5-吡唑 Amberlyst 15離子交換樹脂(干)FoxM1 (D3F2B) Rabbit mAb（2-噻嗯基）酸 Amberli® IRA-900 陰離子交換樹脂XIAP (3B6) Rabbit mAb(環(huán)己酰氨)基酸 乙酰(標(biāo)準(zhǔn)品)XIAP (3B6) Rabbit mAb1,雙(10-十一氧基)
犬諾瓦克病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒白介素16(IL-16)ELISA試劑盒JNK1/2/3 氨基末端激酶1/2/3抗體100 ul 白介素15(IL-15)ELISA試劑盒JAM1/CD321 連接粘附分子120 ul 白介素13(IL-13)ELISA試劑盒p300/KAT3B 轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體100 ul 白介素12受體亞基β-1(IL12RB1/IL12R/IL12RB)ELISA試劑盒KCNA5 鉀電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體100 ul 白介素-12受體(IL-12R)ELISA試劑盒KCNG4/KV6.3 鉀離子通道蛋白G蛋白4抗體100µl 白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒KCNA7 鉀電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員7抗體100 ul 白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒KEAP1 胞質(zhì)接頭蛋白Keap1抗體100 ul 白介素11(IL-11)ELISA試劑盒Ki-67 (Proliferation Marker) Ki67蛋白抗體100 ul 白介素10(IL-10)ELISA試劑盒Ki-67 (Proliferation Marker) Ki-67單克隆抗體100 ul |
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