特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 犬流感病毒11型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Canine Influenza Virus H1N1(CIV-H1N1) | 貨號 | YSP96511 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 1,2-二氯乙烷(標(biāo)準品)CD27 (O323) Mouse mAb (APC-Cy7® Conjuga)(R)-酰 2,二氯酚(標(biāo)準品)Non-phospho (Active) β-Canin (Ser45) (D2U8Y) XP® Rabbit mAb2-羥基異丁酰 4,4'-滴滴滴(標(biāo)準品)Non-phospho (Active) β-Canin (Ser45) (D2U8Y) XP® Rabbit mAb1,2-基異惡唑 2,二甲酚標(biāo)準溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)Autophagy Vesicle Elongation (LC3 Conjugation) Antibody Sampler Kit2-二氯膦酸酯[酸化劑] 3,5-二甲酚標(biāo)準溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)CD3 (UCHT1) Mouse mAb (APC Conjuga)Nα,Nω-二芐氧羰基-L-精氨酸 p, p’-DDE(標(biāo)準品)MUC1 (D9O8K) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)氟-(異基氨甲?;?基酸 p, p’-DDE標(biāo)準溶液(100μg/ml,溶劑:甲)BAFF (D7I1U) Rabbit mAb5-BROMO-2,DIFLUOROPHENYLBORONIC ACID, PINACOL ESR p, p’-DDE標(biāo)準溶液(100μg/ml,u=3%)Fra2 (D2F1E) Rabbit mAb氨基丁酸乙酯鹽酸鹽 p, p’-DDT標(biāo)準溶液(100μg/ml,溶劑:甲)AsCpf1 (Strain <i>BV3L6</i>) (E1U7C) Rabbit mAb反-2-己 p, p’-DDD標(biāo)準溶液(100μg/ml,溶劑:甲)BID Antibody (Human Specific)氯肉桂酸甲酯 2.D丁酯標(biāo)準溶液(100μg/ml,基體:正己烷)BID Antibody (Human Specific)(2R,4S)-羥基吡咯烷-2-羧酸 D751 大孔乙系螯合型離子交換樹脂BID Antibody (Mouse Specific)3,5-二氟芐 2,6-二乙?;拎?99%)FoxP1 Antibody甲基辛酮 敵草(標(biāo)準品)Cas9 (7A9-3A3) Mouse mAb (Biotinylad)(R)-1-乙酰-吡咯烷 鄰二甲酸二正丁酯標(biāo)準溶液(195.0μg/mL,溶劑:甲)OTUD5 (D8Y2U) Rabbit mAb2-(溴基)酸 2-(2,二氟基)吡啶(98.0 %)Phospho-SHIP2 (Tyr986/987) Antibody肌氨酸乙酯鹽酸鹽 4,4'-二溴-2,2'-聯(lián)吡啶(97.0 %)Phospho-β-Canin (Ser33/37) Antibody6-[環(huán)己基(甲基)氨基]嘧啶-酸頻哪酯 4,4′-二叔丁基-2,2′-聯(lián)吡啶(98.0%)Basic FGF Antibody2-氨基嘧啶-5-酸頻哪酯 犬流感病毒11型探針法熒光PCR檢測試劑盒白介素25(IL-25)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser636/639) 酸化胰島素受體底物-1抗體1 mg 白介素24(IL-24)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser789) 酸化胰島素受體底物-1抗體100 ul 白介素23受體(IL-23R)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Tyr1222) 酸化胰島素受體底物-1抗體100 ul 白介素23A(IL-23A)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Tyr895) 酸化胰島素受體底物-1抗體100 ul 白介素23(IL-23)ELISA試劑盒IRS-2 胰島素受體底物-2抗體100 ul 白介素22(IL-22)ELISA試劑盒IRS-3 胰島素受體底物-3抗體100 ul 白介素-21(IL-21)ELISA試劑盒IRS-4 胰島素受體底物-4抗體20 ul 白介素20(IL-20)ELISA試劑盒Ingrin alpha 4/CD49d 整合素α4抗體100 ul 白介素2(IL-2)抗體ELISA試劑盒Ingrin alpha 7 整合素α7抗體20 ul |