PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線(xiàn) (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來(lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線(xiàn)檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線(xiàn)性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
(N-啉)磺酸鈉鹽Phospho-Akt (Ser473) (587F11) Mouse mAb (Biotinylad)六水合硝酸鋅

(N-啉)磺酸半鈉鹽RCC2 (D14F3) Rabbit mAb2-氨基-甲氧基吡啶

MOPS; (N-啉)磺酸TAX1BP1 (D1D5) Rabbit mAb(R)-芐基-2-噁唑烷酮

1-甲氧基-5-甲基酚硫酸甲酯鹽Phospho-Akt (Thr308) (L32A4) Mouse mAb二胍

嗎啉乙磺酸鈉EGF Receptor (D38B1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)八羰基二鈷

嗎啉乙磺酸METTL14 (D8K8W) Rabbit mAb鎢酸鈉

MES一水；一水嗎啉乙磺酸CD161/KLRB1 (HP-3G10) Mouse mAb (APC Conjuga)N,N'-二芐基-1,二

嗎啉乙磺酸半鈉鹽SimpleChIP® Human CaMK2D Intron 3 Primers2-溴-2',4'-二氟乙酮

MES無(wú)水；無(wú)水嗎啉乙磺酸TPH2 (D3E5I) XP® Rabbit mAb2-甲基-甲氧基

羥乙基磺酸鈉HDAC2 (3F3) Mouse mAb二茂鐵

羥乙基醋酸HDAC2 (3F3) Mouse mAb2,5-二甲氧基

羥乙基磺酸銨鹽SQSTM1/p62 AntibodyL-環(huán)基氨酸

羥乙基磺酸SQSTM1/p62 AntibodyN'-*基-L-谷氨酰

N-(2-羥乙基)哌-N-(2-羥基磺酸鈉)AMPA Receptor 3 (GluA3) (D25G9) Rabbit mAb(R)-(-)-1-氨基茚滿(mǎn)

HEPPSO;N-(2-羥乙基)哌-N-(2-羥基磺酸)Importin β1 (E1F1E) Rabbit mAb肉桂酰氯

HEPPS; N-(2-羥乙基)哌-N-2-磺酸Rab9A (D52G8) XP® Rabbit mAb2-氯-氟甲酸

N-(2-羥乙基)哌-N-(2-乙磺酸鈉)Rab9A (D52G8) XP® Rabbit mAb硝酸鈰

HEPES；N-(2-羥乙基)哌-N-(2-乙磺酸)Di-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D85B4) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)硫酸鈰四水合
貓細(xì)小病毒探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體Caspase-6 (NT)/FITC  熒光素標(biāo)記半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)IgG100 ul

酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體Caspase-6 (NT)/FITC  熒光素標(biāo)記半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)IgG100 ul

酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體CASP4/FITC  熒光素標(biāo)記半胱酸蛋白酶蛋白-4抗體IgG100 ul

接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體Caspase-8 /FITC  熒光素標(biāo)記半胱氨酸蛋白酶8抗體IgG100 ul

酸化接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體FLASH/CASP8AP2/FITC  熒光素標(biāo)記半胱氨酸蛋白酶8相關(guān)蛋白2抗體IgG100 ul

膜粘連蛋白7抗體Caspase-9/FITC  熒光素標(biāo)記白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgG20 ul

3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框15抗體Caspase-9/FITC  熒光素標(biāo)記白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgG100 ul

載脂蛋白B受體抗體Phospho-Caspase-9 (Pry153) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgG20 ul

三酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體Caspase-10/FITC  熒光素標(biāo)記半胱酸蛋白酶-10抗體IgG100 ul