樣品RNA的抽提：
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 五日熱巴爾通體探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Bartonella quintana | 貨號(hào) | YSP96428 |
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
本實(shí)用新型技術(shù)公開(kāi)了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過(guò)將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過(guò)側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
6-芐氨基嘌呤SignalSilence® UCHL1 siRNA I甲氧基-5-三氟 純水(HPLC grade)ARID1A/BAF250A (D2A8U) Rabbit mAb2-氟酸乙酯 馬來(lái)酸,順二酸β-Amyloid (1-37 Specific) (D2A6H) Rabbit mAb (Biotinylad)2-氯-氟吡啶 硫酸銨Syk (D1I5Q) Rabbit mAb溴-硝基三氟甲 氯化銫Src Blocking Peptide溴基砜 酸氫二鈉七水SAMHD1 Antibody2-氯氟 dATP溶液(100 mM)DLAT (4AB6-C10) Mouse mAb3'-氯酮 癸酸鈉Histone H2B (D2H6) Rabbit mAb4'-氟-2-基乙酮 交聯(lián)聚乙基吡咯烷酮(PVPP)ROS1 (D4D6®) Rabbit mAb (Biotinylad)6-溴異喹啉 瓊脂糖(美侖電泳級(jí))Nitrocellulose Sandwiches甲基炔基 Bis-Tris；雙(2-羥乙基)氨基(三羥甲基)Thyroid Transcription Factor 1 (TTF-1) (D2E8) Rabbit mAb2-甲氧基噻唑 瓊脂糖(Sigma)SimpleChIP® Human RUNX2 Promor Primers6-溴-羥基喹啉 植物血凝素SimpleChIP® Human MITF Promor Primers甲基吡唑 50% 戊二溶液Immunofluorescence Antibody Dilution Buffer2-氯-酸 6-糠基氨基嘌呤,激動(dòng)素AUF1/hnRNP D (D6O4F) Rabbit mAb3,5-二甲基-硝基吡唑 乙二雙(2-氨基乙基)四乙酸PathScan® Total Caveolin-1 Sandwich ELISA Kit2-乙氧基吡啶 無(wú)水酸二氫鈉(分子生物學(xué)級(jí))UHRF1 (D6G8E) Rabbit mAb2-氯煙酸乙酯 月桂?；“彼徕c(分子生物學(xué)級(jí))BackDrop® Green Background Suppressor噻唑-5-甲酸
五日熱巴爾通體探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒豚鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒Dynamin 2 酶動(dòng)力蛋白2抗體300 ul 豚鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒Nadrin Dysbindin抗體100 ul 豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒Dysferlin Dysferlin蛋白抗體300 ul 豚鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒E2F1 轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體100 ul 豚鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒E2F2 轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體100 ul 豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA試劑盒E2F3 轉(zhuǎn)錄因子E2F-3抗體100 ul 豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒E2F4 轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗體100 ul 豚鼠抗利尿激素/血管加壓素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒E2F5 轉(zhuǎn)錄因子E2F-5抗體300 ul 豚鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)ELISA試劑盒E2F6 轉(zhuǎn)錄因子E2F6抗體100 ul |
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