熒光染料的優(yōu)點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產品名稱 | 伊麗莎白巴爾通體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bartonella elizabethae | 貨號 | YSP96426 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 鹽酸胍RCAS1 (D2B6N) XP® Rabbit mAb1-Cbz-氨基環(huán)烷羧酸 側金盞花,阿東糖,核糖RCAS1 (D2B6N) XP® Rabbit mAb1-甲基-1H-吡唑-酸 酵母浸粉;酵母粉Proin A (HRP Conjuga)氯吡咯并[2,D]嘧啶 核糖核酸酶 A 溶液AD1 (D9X2L) Rabbit mAb氨基-甲基噻吩-2-甲酸甲酯 N,N'-亞甲基雙酰ATP2A1/SERCA1 (D54G12) Rabbit mAb異基酚 D-葡萄糖一水CUEDC2 Antibody2,二甲基-5-基-1H-吡咯-羧酸 十二烷基硫酸鈉(分子生物學級)FXR1 (D10A2) XP® Rabbit mAb甲基膦酸二乙酯 聚乙二6000FXR1 (D10A2) XP® Rabbit mAb7-氯吲哚酮 吐溫20PKR (D7F7) Rabbit mAb2,二氮雜萘 5-溴-氯-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸環(huán)己鹽(X-GLUC)PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet芐氧羰基-N-芐基-Beta-氨酸 曲拉通X-100Pontin/RUVBL1 Antibody氯代硫代甲酰 胰蛋白胨APC2 Antibody2-氯-5-甲酸 生物素;D-生物素;維生素 H 輔酶 RPhospho-Chk1 (Ser317) (D12H3) XP® Rabbit mAb2,2-二氟乙 甘油Phospho-Chk1 (Ser317) (D12H3) XP® Rabbit mAb2,8-雙(三氟甲基)-羥基喹啉 檸檬酸鈉二水;檸檬酸三鈉二水CIN85 (D1A4) Rabbit mAb2-溴甲二乙縮 酸Thap11/Ronin Antibody3,5-二甲基哌啶(順反異構體混和物) 明膠CDX2 (D11D10) Rabbit mAbN(α)-Z-L-2,二氨基酸 Bacto酵母浸粉(BD原裝)Phospho-mTOR (Ser2448) Blocking Peptide氯 -6,7-二甲氧基喹啉 伊麗莎白巴爾通體探針法熒光PCR檢測試劑盒兔6酮F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒DOK1 D酪氨酸激酶衰減蛋白1抗體100 ul 豚鼠ELISA試劑盒DOK2 D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體100 ul 豚鼠組(HIS)ELISA試劑盒Phospho-p56Dok2(Tyr351) 酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體20 ul 豚鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒Phospho-p56Dok2(Tyr299) 酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體300 ul 豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒Phospho-p56Dok2(Tyr142) 酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體100 ul 豚鼠孕激素(progestogen)ELISA試劑盒DPPA2 多能發(fā)育相關基因2抗體100 ul 豚鼠乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒DR3/APO3 死亡受體3抗體100 ul 豚鼠乙型肝炎病毒表面抗體(HBsAb)ELISA試劑盒DR4/APO2 死亡受體4抗體100 ul 豚鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒Death receptor 5/DR5/CD262 腫瘤細胞調亡素/死亡受體5抗體100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 |