熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 普雷沃菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | | 貨號 | YSP97100 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 多聚免疫球蛋白受體(PIGR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 副球菌屬 5g S100鈣結合蛋白A8(S100A8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 大腸埃希氏桿菌 1g S100鈣結合蛋白A9(S100A9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 慢生根瘤菌 25g 干擾素誘導T-細胞α亞族趨化劑(ITαC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 杏鮑菇(13 ) 5g SATB同源框蛋白1(SATB1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 大豆慢生根瘤菌 1g 乳酸脫氫酶C(LDHC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 芽孢桿菌屬 1g CUB帶狀瘡疹透明區(qū)樣域蛋白1(CUZD1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 芽胞桿菌 5g 貓眼綜合征染色體區(qū)候選基因1(CECR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 1g 生長停滯特異性蛋白6(GAS6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 蘇云金芽孢桿菌鲇澤亞種 25g 信號素3E(SEMA3E)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 焦曲霉 5g 抗凝血酶(AT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 玫瑰皮黃鏈霉菌 1g 絨毛蛋白1(VIL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 樟疫霉 5g 前列腺干細胞抗原(PSCA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 貝萊斯芽胞桿菌 1g 前胸腺素α(PTMα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 大腸埃希氏菌 10MG Kruppel樣因子1(KLF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 嗜腳動物咸海鮮球菌 100g 鈉/氫交換因子1(NHE1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 硝酸鹽還原嗜鹽堿桿菌 25g 不均一核核糖核蛋白K(HNRPK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 棲土曲霉 500g 甘油酸肌醇錨定高密度脂蛋白結合蛋白1(GPIHBP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 矩圓黑盤孢 5g 普雷沃菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒胞漿動力蛋白中間鏈1抗體BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(mouse rat) 癌易感基因1抗原( )192.8 mg 胞漿動力蛋白中間鏈2抗體BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(human) 癌易感基因1抗原()100 ul 抑癌蛋白DKK3抗體PSD-95 突觸后密度蛋白95(抗原)1 units 單克隆抗體BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2) 癌易感基因2抗原100 ul 腫瘤壞死因子配體超家族成員10CPTP-1B (Proin-tyrosine phosphatase, non-receptor ) 蛋白酪氨酸酸酶-1B(抗原)30 ml 干擾素誘導蛋白p58ipk抗體RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha) 維甲酸受體-α 多肽100 ul 轉錄調(diào)節(jié)因子DACH2抗體glycoproin (E1 glycoproin) [Rubella virus] 風疹病毒糖蛋白多肽片段100 ul 穿膜蛋白DLK1抗體SAP-1 (Synapse associad proin-I) peptide 突觸相關蛋白-1(多肽抗原)1 Kit Dysferlin蛋白抗體SARS S-proin(抗原) 1 Kit PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |