PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 牛細小病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bovine Parvovirus (BPV) | 貨號 | YSP96470 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! D(+)-二甲酰一水(>98%,BR)IL-6 (D5W4V) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific) (PE Conjuga)氟-甲氧基乙酮 己二二(>98%,BR)Thy1/CD90 (D3V8A) Rabbit mAb甲硫基-1-己 十二基丁二酸酐(>98%,BR)XAF1 (E1E4O) Rabbit mAb2-(三氟甲氧基)甲酰氯 癸二酸(>96%,BR)Ingrin α2b (D8V7H) Rabbit mAb2-(二氟甲氧基)甲 脫氫乙酸(>98%,BR)PTPN14 (D5T6Y) Rabbit mAb氟-三氟甲酸 脫羰秋水仙P2X7 Receptor (E1E8T) Rabbit mAb2,2'-聯(lián)喹啉 DON毒素,嘔吐毒素;脫氧雪腐鐮刀菌(>98%(HPLC),BR)MyoD1 (D8G3) XP® Rabbit mAb1-二甲基氨基-2-硝基乙 第威德合金MyoD1 (D8G3) XP® Rabbit mAb對二甲基 二乙酰一肟(>98%,BR)KIF3B AntibodyS-聯(lián)萘酚酸酯 二丁基二月桂酸錫(>95%,BR)Phospho-Smad1 (Ser463/465)/ Smad5 (Ser463/465)/ Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb異基肼鹽酸鹽 二二(>98%,BR)Phospho-Smad1 (Ser463/465)/ Smad5 (Ser463/465)/ Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb1-氯-2-萘酚 亞硝酸二環(huán)己(>98%,BR)Lamin B2 (E1S1Q) Rabbit mAb甲氧基-2-(三氟甲基)甲 馬來酸二乙酯(>98%,BR)CDIP Antibody4,5-二氟-2-溴 硫酸乙酯(>98%,BR)ERRα (E1G1J) Rabbit mAb3,5-二甲氧基溴芐 二氫細胞松弛素(>98%,BR)SimpleChIP® Mouse OGDH Intron 1 Primers2-氟-6-羥基 二異辛(>98%,BR)NLRX1 (D4M3Z) Rabbit mAb硝基水楊酸 碳酸二甲酯(>99%,BR)SignalSilence® BIN1 siRNA I5-溴-2,二氟磺酰氯 間二甲酸二甲酯(>99%,BR)ASC/TMS1 (E1E3I) Rabbit mAb3,二乙氧基甲酸 牛細小病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1(IFITM1/CD225/IFI17)ELISA試劑盒GST tag GST標簽蛋白抗體100 ul 干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒/GLUR 谷胱甘肽還原酶抗體300 ul 干擾素誘導(dǎo)T細胞趨化因子(ITAC/CXCL11)ELISA試劑盒GTP cyclohydrolase 1/GTP-CH-1 三酸鳥苷環(huán)水解酶抗體5 mg 干擾素活化基因205(Ifi205)ELISA試劑盒GTSE-1 G2期/S期應(yīng)答相關(guān)蛋白1抗體100 ul 干擾素調(diào)節(jié)因子8(IRF8)ELISA試劑盒Matrix Proin-2 (H5N1) A型病毒H5N1-M2蛋白抗體100 ul 干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)ELISA試劑盒matrix proin 2 (H1N1) 甲型流感病毒M2抗體300 ul 干擾素a-抗體(Anti-IFN-ab)ELISA試劑盒H1N1, Matrix Proin-2 A型豬流感病毒H1N1-M2蛋白抗體100 ul 鈣轉(zhuǎn)運ATP酶2C型成員1(ATP2C1)ELISA試劑盒Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病毒血凝素抗體500 ul 鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(CNR-1)ELISA試劑盒Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病毒血凝素抗體100 ul |