PCR技術(shù)的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設(shè)計和反應條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題，反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點：
成本高；
設(shè)計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
鹽酸安他唑啉（標準品）正庚

烏利司他2-溴-氟

鹽酸酚芐明（標準品）溴巴豆酸甲酯

鹽酸那林(標準品)二二單甲

貝諾酯（標準品）1-氨基辛烷

半糖（標準品）N,N-二甲基甘氨酸

醋酸甲萘氫醌（標準品）正辛

富馬酸馬斯汀（標準品）二二

富馬酸馬斯汀二正丁

富馬酸酮替芬（標準品）5-戊酸

己內(nèi)酰（標準品）5-溴-1-戊

酸哌啉（標準品）二二二甲

米諾地爾（標準品）十一烷

尼爾雌（標準品）(S)-2-甲基-CBS-惡唑烷

7-羥基-甲基（標準品）壬酸

7-羥基-甲基環(huán)丁基

十一酸睪酮（標準品）1,烷磺內(nèi)酯

雙嘧達莫（標準品）代吡啶
阿古尼嗜血桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒酸性酸酶樣蛋白2抗體Phospho-Dab1 (Tyr220) /FITC  熒光素標記兔抗、大、Disabled 1抗體IgG20 ul

AHNAK核蛋白2抗體Phospho-Dab1 (Tyr232) /FITC  熒光素標記兔抗、大、Disabled 1抗體IgG100 ul

二酸腺苷核糖基化因子6相互作用蛋白抗體Phospho-Dab1 (Ser491) /FITC  熒光素標記兔抗、大、Disabled 1抗體IgG100 ul

p53誘導蛋白5抗體Phospho-DBC1 (Thr454) /FITC  熒光素標記兔抗、大、膀胱癌缺失基因1IgG100 ul

錨蛋白重復域5抗體DAP-5/p97 /FITC  熒光素標記死亡相關(guān)蛋白5抗體IgG100 ul

腦鈉通道蛋白2抗體DBC1/FITC  熒光素標記兔抗、大、膀胱癌缺失基因1抗體IgG100 ul

腦鈉通道蛋白4抗體DAPK1/FITC  熒光素標記凋亡相關(guān)蛋白激酶1抗體IgG100 ul

小腸鈉通道蛋白5抗體DAPK2/FITC  熒光素標記凋亡相關(guān)蛋白激酶2抗體IgG100 ul

APXL蛋白抗體DAPK3/FITC  熒光素標記凋亡相關(guān)蛋白激酶3抗體IgG100 ul