樣品RNA的抽提: ①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 馬鏈球菌馬亞種探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus equi subspecies equi | 貨號 | YSP97224 |
實驗過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 EDTA二鉀血液抗凝液 MAGEA11 ELISA Kit 100 ul EDTA三鉀血液抗凝液 MAGEA3(Melanoma-associated antigen 3) ELISA Kit 100 ul EDTA鈉血液抗凝液 MAGEA4 ELISA Kit 100 ul ACD血液抗凝液 MAGEA6 ELISA Kit 20 ul 肝素鈉血液抗凝液 MAGEA8 ELISA Kit 100 ul OXALATE(鈉鹽)血液抗凝液 MAGEB1 ELISA Kit 100 ul OXALATE(鉀鹽)血液抗凝液 MAGI1 ELISA Kit 100 ul OXALATE(氨鹽)血液抗凝液 MAGIX ELISA Kit 100 ug OXALATE(氨鉀鹽)血液抗凝液 MAGEB18 ELISA Kit 100 ul FLUORIDE血液抗凝液 MAGT1 ELISA Kit 100 ul OXALATE/FLUORIDE混合血液抗凝液 MAGOH ELISA Kit 100 ul 大量Lipofusin脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 MAGEA8 ELISA Kit 100 ul 小量LipofusinX脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 MAGEB1 ELISA Kit 100 ul 小量Sperfusin脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 MAGEB18 ELISA Kit 1 Kit QuikFusin非脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 MAGEB4 ELISA Kit 100 ul 重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染試劑盒 LZTS2 ELISA Kit 100 ul 馬鏈球菌馬亞種探針法熒光PCR檢測試劑盒細(xì)絲蛋白2抗體TH1/TH2 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子1 Kit 酸化細(xì)絲蛋白2抗體HLA-G 類白細(xì)胞抗原G100 ul 酸化FMS樣酪氨酸激酶3抗體CTGF 結(jié)締組織生長因子100 ul 肢體畸形相關(guān)蛋白FMN1抗體NPY(humen) 神經(jīng)肽Y100 ul 二單加氧酶3抗體Ghrelin(Human) 腦腸肽100 ul 二單加氧酶5抗體Galectin-3(human) 半糖凝集素-3100 ul 酸化脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF1抗體MIP-1 Alpha 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α100 ul 果糖-3激酶抗體MIP-1 Gamma 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1γ100 ul 甲精結(jié)合蛋白3抗體MIP-1 Beta 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β10 mg |